三種細(xì)胞活性檢測法比較：發(fā)光法、熒光法和吸光度法

瀏覽次數(shù)：1767　發(fā)布日期：2023-9-7　來源：本站　僅供參考，謝絕轉(zhuǎn)載，否則責(zé)任自負(fù)

細(xì)胞活性檢測已成為現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室的重要工具。高通量細(xì)胞活性檢測廣泛應(yīng)用于篩選實(shí)驗(yàn)，如化合物毒性篩選，或識別選擇性殺死癌細(xì)胞的化合物，還有一個(gè)常見用途是篩查環(huán)境毒素。

酶標(biāo)儀可利用多種活性檢測試劑盒測定吸光度（Abs）、熒光強(qiáng)度（FI）或化學(xué)發(fā)光（Lum），以量化細(xì)胞活性。如何為自己的研究做出最佳選擇讓用戶犯了愁。

為此，我們選取基于吸光度、熒光和化學(xué)發(fā)光讀數(shù)的三種市售細(xì)胞活性檢測試劑盒，分別是CellTiter-Glo 2.0®（Promega）、Alamar blueTM和Vybrant®MTT（均來自Thermo Fisher Scientific；圖1）。為了幫助客戶做選擇，我們使用HeLa細(xì)胞，在96孔板和384孔板中置入25-50000個(gè)細(xì)胞/孔，以建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，對動(dòng)態(tài)范圍、檢測下限和檢測上限，以及處理方面的性能進(jìn)行比較。

圖1. Vybrant MTT、alamarBlue和CellTiter-Glo的細(xì)胞活性檢測原理

活性檢測靈敏度的比較

如圖2所示，CellTiter-Glo的檢測下限（LOD）最低，其次是alamarBlue和Vybrant MTT。通常來講，384孔板支持檢測較低的細(xì)胞數(shù)量，是由于底物/細(xì)胞比率較高。

圖2. 使用HeLa細(xì)胞比較活性檢測試劑盒的檢測下限

活性檢測動(dòng)態(tài)范圍的比較

在所有測定中都觀察到細(xì)胞數(shù)量對應(yīng)的信號有明顯增強(qiáng)。然而，在最大濃度范圍內(nèi)觀察到的線性關(guān)系隨著細(xì)胞濃度的升高而減弱（圖3A、B、C）。這種影響可能主要?dú)w因于底物的有限。底物轉(zhuǎn)換/細(xì)胞比率在很大程度上取決于細(xì)胞類型和細(xì)胞培養(yǎng)條件，如FCS的可用性。在這種情況下，相對活躍的HeLa細(xì)胞使轉(zhuǎn)換/細(xì)胞比率增高，使LOD降低，但同時(shí)在高細(xì)胞濃度下產(chǎn)生初期飽和效應(yīng)。需要注意的是，制造商提供的建議是一般指導(dǎo)，在必要時(shí)，應(yīng)對一些參數(shù)進(jìn)行檢查，提前根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行調(diào)整。有可能涉及的調(diào)整參數(shù)包括細(xì)胞總數(shù)、細(xì)胞與試劑量的比率，以及對應(yīng)的孵育時(shí)間。

圖3. 384孔和96孔板的HeLa細(xì)胞活性標(biāo)準(zhǔn)曲線。（A）Vybrant MTT，Abs（B）AlamarBlue，F(xiàn)I（C）CellTiter-Glo，Lum。誤差線代表8次重復(fù)

結(jié)論

BMG LABTECH的VANTAstar®酶標(biāo)儀（圖4）擁有高靈敏度，可覆蓋大范圍的細(xì)胞活性檢測讀數(shù)，提供完美的檢測平臺。配備光柵和光譜儀，在波長選擇方面提供了充分的靈活性，這種靈活性同時(shí)體現(xiàn)在活性檢測的選擇。動(dòng)態(tài)范圍擴(kuò)展技術(shù)（EDR）和自動(dòng)聚焦調(diào)整使分析檢測變得更加簡單，無需進(jìn)行初步增益或聚焦優(yōu)化。

圖4. VANTAstar酶標(biāo)儀

CellTiter-Glo支持通過簡單的添加和讀取程序檢測<10個(gè)細(xì)胞/孔，而AlamarBlue提供了FI或Abs檢測兩種選擇，并且支持動(dòng)力學(xué)監(jiān)測，因?yàn)榧?xì)胞不需要被裂解。AlamarBlue是最實(shí)惠的選擇，其次是Vybrant MTT，最后是CellTiter-Glo。

轉(zhuǎn)載自BMG LABTECH

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