CY5/CY5.5熒光成像效果之物鏡篇
如何提升CY5/CY5.5熒光成像效果之物鏡篇
在之前的系列文章中，我們已經給大家介紹過如何從攝像頭、熒光光源、熒光激發(fā)塊幾方面提升CY5/CY5.5的成像效果，今天我們繼續(xù)為大家?guī)�，如何從物鏡層面進行提升。
一、物鏡如何影響CY5/CY5.5熒光成像？
落射熒光顯微成像中，選擇一個合適的物鏡對于良好的熒光顯微成像質量有著至關重要的作用。因為落射熒光成像中激發(fā)光和發(fā)射光均要經過物鏡，物鏡的熒光通過率會非常影響成像熒光效率，熒光通過率低的物鏡成像信號會更弱，信噪比低。cy5/cy5.5標記的熒光成像信號比一般的弱，因此需要更好的物鏡，一般建議至少需要半復消色差級別的物鏡，這個級別或以上的物鏡，才能有效透過熒光信號，提供高對比度、無背景熒光噪聲的圖像。
落射熒光成像中光要經過物鏡兩次
二、如何選擇合適的熒光物鏡
在落射熒光成像中，物鏡既是落射熒光系統的“聚光鏡”，也是利用光線使標本第一次成實像的核心部件，因而直接關系和影響成像的質量和各項光學技術參數。在cy5/cy5.5熒光顯微成像應用中，想要獲得理想的成像效果，需重點對物鏡以下幾個參數進行考量。
顯微鏡物鏡標識
（1）數值孔徑。在物鏡參數中可用NA表示，一般在倍數標識后面，在空氣系物鏡中，NA值小于1，油鏡或水鏡可大于1，NA值越大，代表該物鏡分辨率越高，細節(jié)表現越清晰。簡單理解，同樣倍數的物鏡，數值孔徑越高，收集光的能力越強，細節(jié)越好。
分辨率越高細節(jié)越清楚
（2）色差矯正能力和場曲。數值孔徑越高，樣品細節(jié)越清晰，但同時高倍放大下的色差也會更明顯。色差是不同波長的光在同一介質中有不同的折射率，在物鏡成像時導致的光學瑕疵，通俗的理解就是圖像有光暈。通過不同透鏡組合設計，可減少或消除色差，根據對波長矯正覆蓋范圍大小，可分為消色差（ACH）、半復消色差（FL/Semi-APO）、復消色差（APO）物鏡，同樣倍數物鏡，消色差越強數值孔徑也越高；不同品牌的同級消色差設計，光譜矯正覆蓋范圍會有不同，大致可參考下圖。
cy5/cy5.5的最大發(fā)射波長一般都在670nm以上，甚至可達700nm，因此低數值孔徑的消色差物鏡不太好用，使用數值孔徑更高的半復消色差物鏡和復消色差物鏡效果更好，信號更強，信噪比高，可減少信號附近的色差。
左有色差矯正，右無矯正
另外還有一點是場曲矯正，會影響視場清晰的范圍，有場曲矯正能力的物鏡一般稱為平場物鏡（plan），可矯正透鏡成像導致的圖像畸變，使整個視野都平坦清晰。
無場曲矯正，圖像存在畸變
明美物鏡方案
（1）M-UPlanFLN系列
□高數值孔徑，分辨率高
□高透光率
（2）PlanFluor系列
□高數值孔徑，提供高清晰度、高對比度熒光圖像
□熒光成像背景信號更純凈
（3）Apo系列
□平場復消色差物鏡，可對700nm附近的圖像色差進行矯正
□高數值孔徑，分辨率高
□弱熒光信號下成像清晰
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