解析Lonza 96孔電轉(zhuǎn)模塊兩大應(yīng)用案例

2023年Lonza Neclefector™技術(shù)面世22周年，成功應(yīng)用于原代細(xì)胞、干細(xì)胞、神經(jīng)元等難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞中，文獻(xiàn)引用量超過(guò)23,000+篇，成為基因治療、細(xì)胞治療、免疫治療研究中的一大助力。
 

隨著技術(shù)和產(chǎn)業(yè)的進(jìn)一步發(fā)展，高通量核轉(zhuǎn)染的需求越來(lái)越高。Lonza推出的4D-Nucleofector™ 96孔模塊，每塊板最多可運(yùn)行96個(gè)獨(dú)立程序，非常適合于中高通量的電轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)，具有快速、通量高、編輯效率優(yōu)秀等特點(diǎn)，可廣泛應(yīng)用于陣列cDNA、工業(yè)生產(chǎn)元件、RNAi以及CRISPR文庫(kù)篩選中，是優(yōu)化電轉(zhuǎn)條件、藥物靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)以及疫病研究的高效工具。

應(yīng)用案例分享

#1

 

文獻(xiàn)名稱：A platform for context-specific genetic engineering of recombinant protein production by CHO cells

應(yīng)用方向：提高工業(yè)生產(chǎn)效率

發(fā)表期刊：Journal Of Biotechnology

發(fā)表時(shí)間：2020

研究?jī)?nèi)容：在蛋白質(zhì)生產(chǎn)中，為了提高細(xì)胞系生產(chǎn)效率，往往需要針對(duì)目的蛋白（Target Protein）尋找到最合適的表達(dá)載體和培養(yǎng)條件。因此篩選表達(dá)載體過(guò)程中需要高通量方法（HT）高效的表達(dá)不同載體并測(cè)試其細(xì)胞性能（蛋白質(zhì)生產(chǎn)效率及細(xì)胞生長(zhǎng)能力），作者利用Lonza 96-well Shuttle™產(chǎn)品，在蛋白生產(chǎn)細(xì)胞系CHO中實(shí)現(xiàn)表達(dá)載體的高效篩選。
 

作者報(bào)道的實(shí)際測(cè)試數(shù)據(jù)：

A. Lonza 96-well Shuttle™產(chǎn)品轉(zhuǎn)染效率（Transfection Efficiency）平均高達(dá)90%，且針對(duì)不同遺傳載體轉(zhuǎn)染效率差異較小

C. Lonza 96-well Shuttle™產(chǎn)品在隨著加大電轉(zhuǎn)質(zhì)粒DNA量(Mass of mAB Expressing Plasmid DNA)加大對(duì)細(xì)胞活力(Growth Rate)影響較小

D. Lonza 96-well Shuttle™產(chǎn)品在不同批次(Replicates)電轉(zhuǎn)中，批間差異小(Coefficient of Variation)

 

#2

 

文獻(xiàn)名稱：Validation of efficient high-throughput plasmid and siRNA transfection of human monocyte-derived dendritic cells without cell maturation

應(yīng)用方向：針對(duì)免疫細(xì)胞進(jìn)行DNA高效轉(zhuǎn)染及RNAi篩選

發(fā)表期刊：J Immunol Methods

發(fā)表時(shí)間：2010

研究?jī)?nèi)容：針對(duì)原代免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染，傳統(tǒng)電轉(zhuǎn)往往效率低下并且會(huì)導(dǎo)致原代免疫細(xì)胞活化及成熟，為后續(xù)原代免疫細(xì)胞研究以及工業(yè)生產(chǎn)造成影響。本文中，作者利用Lonza 96-well Shuttle™產(chǎn)品，構(gòu)建針對(duì)原代樹(shù)突狀細(xì)胞（Primary Dendritic cells）高效轉(zhuǎn)染的平臺(tái)，針對(duì)難以轉(zhuǎn)染原代樹(shù)突狀細(xì)胞實(shí)現(xiàn)70%細(xì)胞活率及超50%的轉(zhuǎn)染效率。并利用該高效轉(zhuǎn)染平臺(tái)在原代樹(shù)突狀細(xì)胞中敲低RIG-I實(shí)現(xiàn)干擾素beta的下調(diào)表達(dá)。
 

作者報(bào)道的實(shí)際測(cè)試數(shù)據(jù)：

作者使用Lonza特異性轉(zhuǎn)染緩沖液在單核樹(shù)突狀細(xì)胞（MoDCs）測(cè)試不同程序下（Nucleoporation Program，X軸）轉(zhuǎn)染GFP的效率。可見(jiàn)利用Lonza 96-well Shuttle™高通量系統(tǒng)篩選出FF137/FF168具有接近60%的轉(zhuǎn)染效率，并且保持90%以上的未成熟單核樹(shù)突狀細(xì)胞狀態(tài)。

作者隨后測(cè)試了FF168程序在單核樹(shù)突狀細(xì)胞中siRNA轉(zhuǎn)染效率，RIG-I蛋白表達(dá)量在核轉(zhuǎn)染后顯著下調(diào)。

在全新升級(jí)的Lonza 4D-Nucleofector™ 96孔電轉(zhuǎn)模塊中，可直接與4D-Nucleofector™ 核心模塊連接使用，用于96孔格式的中通量核轉(zhuǎn)染。每塊板最多可運(yùn)行96個(gè)獨(dú)立程序，非常適合于優(yōu)化核轉(zhuǎn)染條件或作為中高通量篩選的有效工具。

應(yīng)用

● 只需一塊板即可優(yōu)化任何難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞
● 測(cè)試建立實(shí)驗(yàn)的多個(gè)條件
● 篩選cDNA, RNAi或CRISPR、TCR文庫(kù)
● 適用于細(xì)菌轉(zhuǎn)化

優(yōu)點(diǎn)

● 高效助力優(yōu)化、篩選

每塊板最多可運(yùn)行96個(gè)獨(dú)立程序，在5分鐘內(nèi)自動(dòng)處理

● 可拓展性

模塊化6×16 Nucleocuvette™板實(shí)現(xiàn)可拓展的通量

● 電轉(zhuǎn)條件可轉(zhuǎn)化性

可在不同4D-Nucleofector™模塊中，使用相同優(yōu)化好的電轉(zhuǎn)條件，實(shí)現(xiàn)不同細(xì)胞量/通量的實(shí)驗(yàn)需求

● 自動(dòng)化兼容

無(wú)縫集成到自動(dòng)化液體處理環(huán)境中

優(yōu)化方案

4D-Nucleofector™ 96孔模塊可使用現(xiàn)有的96-well 電轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)方案或參考X-unit 20uL體系電轉(zhuǎn)實(shí)驗(yàn)方案和導(dǎo)電聚合物96孔Nucleocuvette™板。

Lonza Knowledge Center中的Cell & Transfection Database中提供了特定細(xì)胞類型的優(yōu)化方案或建議。在這些優(yōu)化方案中，指出了經(jīng)過(guò)內(nèi)部測(cè)試的核轉(zhuǎn)染條件。此外，還會(huì)分享我們?cè)谔幚硖囟��?xì)胞類型方面的經(jīng)驗(yàn)和知識(shí)，有效助力您的實(shí)驗(yàn)。