BET抑制劑JQ1(JQ-1)

(+)-JQ-1(JQ1)是一種有效特異性的可逆BET bromodomain抑制劑，抑制BRD4(1/2)的IC50分別為77 nM和33 nM。(+)-JQ-1激活自噬(autophagy)。

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生物活性

體外研究

(+)-JQ-1代表溴結(jié)構(gòu)域BET家族的一種有效、高度特異性和Kac競爭性抑制劑。JQ-1(100 nM，48 h)促進(jìn)鱗狀分化，表現(xiàn)為細(xì)胞紡錘形、扁平化和角蛋白表達(dá)增加。與(-)-JQ1(250 nM)和載體對照相比，JQ1(250 nM)在經(jīng)處理的NMC 797細(xì)胞中誘導(dǎo)角蛋白的快速表達(dá)，如通過定量免疫組織化學(xué)所確定的。(+)-JQ-1(與(-)-JQ1(250 nM)相比)會引發(fā)經(jīng)處理的NMC 797細(xì)胞的時間依賴性強(qiáng)(3+)角蛋白染色。添加JQ-1后幾乎立即觀察到自噬基因的去抑制。(+)-JQ-1是BET家族共激活蛋白BRD4的一種有效的噻吩二氮卓抑制劑(Kd=90 nM)，通過MYC致癌基因的轉(zhuǎn)錄控制參與癌癥的發(fā)病機(jī)制。JQ1的劑量范圍研究證明有效抑制H4Kac4結(jié)合，小鼠BRDT(1)的IC50值為10 nM，人BRDT(1)的IC50值為11 nM。

體內(nèi)研究

已確定腫瘤的匹配小鼠隊(duì)列隨機(jī)接受JQ1(50 mg/kg)或載體處理，每日腹膜內(nèi)注射。在隨機(jī)化之前和處理四天之后，通過FDG-PET成像評估小鼠。(+)-JQ1處理觀察到FDG攝取顯著減少。腫瘤體積測量證實(shí)JQ1處理可減少腫瘤生長。JQ1的藥代動力學(xué)研究是在CD1小鼠靜脈內(nèi)和口服給藥后進(jìn)行的。靜脈內(nèi)給藥(5 mg/kg)后(+)-JQ1的平均血漿濃度-時間曲線。靜脈內(nèi)(+)-JQ1的藥代動力學(xué)參數(shù)顯示出出色的藥物暴露(AUC=2090 hr*ng/mL)和大約一小時的半衰期(T1/2)。制定口服給藥(10 mg/kg)后(+)-JQ1的平均血漿濃度-時間曲線�？诜�JQ1的藥代動力學(xué)參數(shù)表現(xiàn)出出色的口服生物利用度(F=49%)、血漿峰濃度(Cmax=1180 ng/mL)和藥物暴露量(AUC=2090 hr*ng)/mL)。

動物實(shí)驗(yàn)參考方法

細(xì)胞試驗(yàn)

NUT中線癌患者細(xì)胞系(797和11060)被鍍于T-25燒瓶中，并在含有10%胎牛血清的DMEM(797)或RPMI(11060)中生長。細(xì)胞分別用250 nMjq1、250 nM(-)-jq1或同等體積的DMSO(0.025%)處理。在所需的時間點(diǎn)，2×106細(xì)胞在500×g下在4°C下旋轉(zhuǎn)5分鐘，并用PBS洗滌。將顆粒重懸于1ml冷PBS中，并在15ml聚丙烯離心管中緩慢旋轉(zhuǎn)至9ml 70%乙醇中，同時滴加。然后將固定的細(xì)胞在-20°C下冷凍過夜。第二天，細(xì)胞在4℃下500x g離心10分鐘，用3ml冷PBS洗滌。將細(xì)胞重懸于500μL碘化丙啶染色液(0.2 mg/mL RNAse A,0.02 mg/mL碘化丙啶，0.1%Triton-X in PBS)中，37℃孵育20分鐘。然后將樣品轉(zhuǎn)移到冰上并在BD FACS上進(jìn)行分析。使用FlowJo流式細(xì)胞術(shù)分析軟件生成直方圖并進(jìn)行細(xì)胞周期分析。

動物實(shí)驗(yàn)

小鼠

匹配的腫瘤小鼠隊(duì)列隨機(jī)接受(+)-JQ1(50 mg/kg)或?qū)φ阵w治療，每日腹腔注射。雄性CD1小鼠(24-29 g)接受單劑量(+)-JQ1(5 mg/kg)尾靜脈注射和10 mg/kg灌胃。

大鼠

成年雄性Sprague-Dawley大鼠分別給藥或(+)-JQ1(10 mg/kg)。治療以體重的1/100給予IP。每天兩次檢查大鼠的死亡率，并在第1、3、7、14和21天稱重。治療方案為4天，每天給藥50mg/kg JQ1，由于在一小部分動物中出現(xiàn)了不良反應(yīng)，在研究的剩余時間內(nèi)，每天兩次將劑量降至10mg/kg。對于所有完成3周治療的動物，睪丸質(zhì)量、精子活力和精子數(shù)量按照小鼠研究的描述進(jìn)行測定。簡而言之，將睪丸固定在Bouin's，并為組織學(xué)做準(zhǔn)備。另一半在溫暖的M16緩沖液中切碎，用于精子計(jì)數(shù)和運(yùn)動研究。

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