布魯氏菌cELISA抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）使用說明書

【產品名稱】
通用名：布魯氏菌cELISA抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）
英文名：cELISA Kit for Detection of Brucella Antibody

【包裝規(guī)格】 96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

【預期用途】 布魯氏菌病是由布魯氏菌（Brucella）引起的人、畜共患傳染病，其特征是生殖器官和胎膜炎，引起流產、不育和各種組織的局部病灶。
本試劑用于檢測牛、羊血清中布魯氏桿菌抗體，可用于布魯氏菌疫苗免疫效果評價或該病的輔助診斷。

【原    理】
本試劑盒由預包被布魯氏菌抗原的酶標板、酶標記物、抗體工作液及其他配套試劑組成，應用競爭酶聯免疫法（ELISA）原理檢測牛羊血清、血漿樣本中布魯氏菌抗體。實驗時在酶標板中加入待檢樣本及酶標記物、抗體工作液，經溫育后若樣品中含有布魯氏菌抗體，則將與抗體工作液競爭結合酶標板上抗原，酶標記物與抗體工作液及酶標板上抗原形成復合結合物；再經洗滌除去未結合的其他成分，在孔中加TMB底物液，若樣品中含有布魯氏菌抗體則將阻斷酶標記物、抗體工作液與酶標板上抗原結合，從而使后續(xù)反應不出現顯色；反之則出現顯色；顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成負相關；加入終止液終止反應后，產物變?yōu)辄S色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有布魯氏菌抗體。

【試劑盒組成】

序號	名稱	規(guī)格/96T×1	規(guī)格/96T×2	規(guī)格/96T×5
1	酶標記物	6ml×1(紅蓋)	11ml×1(紅蓋)	26ml×1(紅蓋)
2	抗體工作液	6ml×1(藍蓋)	11ml×1(藍蓋)	26ml×1(藍蓋)
3	20X濃縮洗滌液	40ml×1(白蓋)	40ml×1(白蓋)	200ml×1(白蓋)
4	底物液A	6ml×1(白蓋)	11ml×1(白蓋)	26ml×1(白蓋)
5	底物液B	6ml×1(黑蓋)	11ml×1(棕蓋)	26ml×1(黑蓋)
6	終止液	6ml×1(黃蓋)	11ml×1(黃蓋)	26ml×1(黃蓋)
7	陽性對照	1.0 ml×1(紅蓋)	1.5 ml×1(紅蓋)	2.0 ml×1(紅蓋)
8	陰性對照	1.0 ml×1(綠蓋)	1.5 ml×1(綠蓋)	2.0 ml×1(綠蓋)
9	酶標板	96T×1	96T×2	96T×5
10	蓋板膜	1	2	5
11	自封袋	1	1	2
12	說明書	1	1	1
13	稀釋板	1	2	5

【儲存及有效期】 2～8℃保存，有效期12個月。
包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮，使用期限為2個月。

【適用儀器】 含450nm、630nm波長的酶標儀，37℃恒溫設備，可調微量移液器。

【樣品準備】
1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。
2.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。
3.用工作洗滌液將待檢牛血清先按10倍稀釋（如10μl血清加入90μl工作洗滌液中，混勻），待檢羊血清按25倍稀釋（如4μl血清加入96μl工作洗滌液中，混勻），陰、陽性對照不用稀釋。

【檢驗方法】
1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。
2.取所需用量酶標板條，設陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照50μl；樣品孔每孔先加入稀釋后的血清樣品50μl。然后每孔依次加入50μl酶標記物、50ul抗體工作液。
4.混勻，蓋好蓋板膜，置37℃（推薦水�。┍芄夥磻�45分鐘。
5.甩去孔內液體，每孔加350μl工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，最后一次拍干。
6.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應15分鐘。
7.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。

【參考值】實驗正常的情況下，陰性對照吸光值≥1.0，陽性對照吸光值≤陰性對照吸光值×50%。

【檢驗結果的解釋】
1. PI（阻斷率）=（1- 陰性對照平均A值(樣本A值)）×100%，PI≥50%為陽性；PI＜50%為陰性。
2. 本實驗結果為陽性時表明動物樣本含有布魯氏菌抗體，需結合臨床及其他方法進行分析。

【試驗方法的局限性】
本檢測結果僅供篩查，不作為確診依據。

【注意事項】
1.實驗操作時需戴手套、穿工作衣，嚴格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實驗廢棄物都應按傳染物處理。
2.終止液具有腐蝕性，應避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。
3.酶標板從冷藏環(huán)境中取出時應恢復至室溫方可開袋，未用完的酶標板需放入有干燥劑的密封袋中保存。
4.濃縮洗滌液在低溫時容易結晶，使用時需恢復至室溫以完全溶解。
5.洗滌時各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。
6.用于檢測的樣品應保持新鮮。
7.試驗結果的判定必須以酶標儀讀數為準。
8.不同批號試劑組分不得混用。