利用細胞計數(shù)儀進行細胞尺寸測量的優(yōu)勢

一、概述

細胞尺寸在生物研究中至關(guān)重要。越來越多研究揭示了細胞大小和表型特征（如干性特征、增殖能力和代謝狀態(tài)）之間復(fù)雜的相關(guān)性。在生物制造等應(yīng)用的工藝流程中，細胞大小是評估細胞治療中分批培養(yǎng)或原材料細胞是否健康的關(guān)鍵指標。因此，自動細胞計數(shù)中可靠的細胞大小測定已成為重要的結(jié)果。

點成LUNA-FX7細胞計數(shù)儀可精確提供細胞大小的數(shù)據(jù)。除了所有點成LUNA系列細胞計數(shù)儀共有的標準細胞尺寸門控功能外，點成LUNA-FX7計數(shù)輸出還包括與每個細胞活力狀態(tài)結(jié)合的尺寸測定。此外，點成LUNA-FX7具有多種方法來根據(jù)計數(shù)期間和計數(shù)后的大小對細胞群進行分析和分類。在此，我們展示了點成LUNA-FX7在測量細胞尺寸上的準確性和可靠性及其精確的尺寸門控功能。為了評估確定細胞大小的準確性，在明場總細胞計數(shù)模式下對六種不同的NIST可追蹤粒度標準品和兩種細胞系A(chǔ)sPC-1(胰腺癌)和DLD-1(結(jié)腸癌)進行了計數(shù)。

二、實驗過程

1、精確測量各種粒徑

六種不同的NIST可追蹤粒徑標準品(10-46 μm)在點成LUNA-FX7的明場總細胞計數(shù)模式下進行計數(shù)。測定粒徑的準確度為96.7%以上。相反，市面上大多細胞計數(shù)儀對于10 μm或更小和50 μm及更大的顆粒則不準確。

NIST可追蹤粒度標準的尺寸測定。

(A-F)圖像顯示了標記良好的顆粒，表明顆粒直徑尺寸的精確測量。

(G)該表顯示了LUNA-FX7™和競爭對手計數(shù)器的測量顆粒尺寸和尺寸測量精度。

2、混合條件下目標尺寸顆粒的計數(shù)

為了評估點成LUNA-FX7中尺寸測量的精確性，我們準備了四種不同比例的NIST可追蹤粒徑標準品（~10 μm、20 μm、40 μm和60 μm）的混合物。最初，我們對最小細胞尺寸值為3 μm和最大細胞尺寸值為60 μm的混合顆粒進行計數(shù)，該值是根據(jù)默認協(xié)議進行修改的。計數(shù)后，生成細胞濃度與細胞大小的直方圖，并且NIST標準已正確分類。

精確的尺寸測定。

(A) 圖像顯示了標記良好的各種尺寸的顆粒。

(B-C)直方圖指示NIST顆粒按尺寸的準確分布。

執(zhí)行選定的尺寸門控，生成適合目標尺寸的完美標簽，尺寸測量的準確度超過96.2%。此外，尺寸門控可以輕松應(yīng)用于點成LUNA-FX7，通過計數(shù)前預(yù)設(shè)的協(xié)議，通過計數(shù)后立即調(diào)整直方圖，或利用具有不同大小參數(shù)的協(xié)議重新分析存儲的計數(shù)數(shù)據(jù)。

LUNA-FX7™中特定尺寸的門控。

標記的圖像和直方圖顯示，目標尺寸的顆粒（以橙色表示）通過門控進行了集中、選擇性和排他性的檢測。

3、細胞系的計數(shù)和尺寸門控應(yīng)用

最后，我們計數(shù)了兩種不同大小范圍的細胞系：AsPC-1（胰腺癌）和DLD-1（結(jié)腸癌）。健康的AsPC-1 細胞的尺寸范圍為8 - 40 µm，而健康的DLD-1細胞的尺寸范圍預(yù)計較窄，為10 - 20 µm。LUNA-FX7™ 準確捕獲兩個種群的整個大小范圍。

AsPC-1和DLD-1細胞的細胞計數(shù)和大小測定。

應(yīng)用AsPC-1 (A-C)和DLD-1 (D-F)細胞系來確認不同尺寸混合的計數(shù)性能。

4、結(jié)論

點成LUNA-FX7™有多種方法來測量、區(qū)分和確定細胞群的大小。點成LUNA-FX7™具有計數(shù)期間和計數(shù)后預(yù)定義大小門控選項，可靈活評估細胞群的健康狀況和質(zhì)量。此外，點成LUNA-FX7™的再分析功能可以對下游分析中保存的珍貴計數(shù)進行更廣泛的評估。