蛋白酶體抑制劑Celastrol雷公藤紅素

Celastrol(Tripterine;Tripterin)是一種蛋白酶體抑制劑，有效且優(yōu)先抑制20S蛋白酶體的胰凝乳蛋白酶樣活性，IC50為2.5μM。

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Celastrol雷公藤紅素的生物活性

體外研究

雷公藤紅素Celastrol(Tripterine；Tripterin)以濃度依賴性方式顯著抑制PC-3細(xì)胞中蛋白酶體胰凝乳蛋白酶的活性；在2.5μM時，它達(dá)到約55%的抑制，與其對純化的20S蛋白酶體的效力相當(dāng)(IC50=2.5μM)。此外，觀察到IκB-α、Bax和p27水平升高，這是用雷公藤紅素Celastrol處理的PC-3細(xì)胞中蛋白酶體的三種眾所周知的靶蛋白。

體內(nèi)研究

用雷公藤紅素Celastrol(1-3 mg/kg/d，腹腔注射，1-31天)處理攜帶PC-3腫瘤的裸鼠導(dǎo)致顯著抑制腫瘤生長(65-93%)。

用3和6 mg/kg Celastrol處理后，丙二醛(MDA)水平分別顯著降低35.2%和36.7%(P<0.05)。用3和6 mg/kg的Celastrol處理可顯著將GSH水平(P<0.05)恢復(fù)到幾乎正常的水平。

Celastrol雷公藤紅素的實(shí)驗(yàn)參考方法

激酶分析

將純化的兔20S蛋白酶體（0.1μg）與各種熒光肽基質(zhì)（40μM）在100μL的測定緩沖液中（20 mM Tris-HCl，pH 7.5），在雷公藤紅素Celastrol或Oridonin的不同濃度下或在DMSO溶劑中孵育2小時，37°C后，測量每個蛋白酶體活性的抑制率。

細(xì)胞測定

前列腺癌細(xì)胞（5,000-8,000）被接種在96孔板的每個孔中，然后用DMSO、雷公藤紅素Celastrol或Oridonin處理12到16小時，于不同濃度下，隨后再額外加入Z-Gly-Gly-Leu-AMC（40μM）孵育2小時。之后，使用整個板來測量蛋白酶體的活性。

動物給藥

小鼠

使用年齡為5周的雄性裸鼠(NCRNU-M)，該裸鼠具有免疫缺陷。在第0天，將人前列腺癌PC-3或C4-2B細(xì)胞(5-10×106)懸浮于0.1 mL無血清RPMI 1640中，注射到每只鼠右側(cè)腹部皮下（每組四只小鼠）。在使用PC-3細(xì)胞的第一個實(shí)驗(yàn)中，接種后的第14天，動物開始每天腹腔內(nèi)注射50至100μL的處理劑（包含10% DMSO、70% Cremophor/乙醇（3:1）和20% PBS），以及1.0或3.0 mg/kg的Celastrol。使用卡尺每天測量腫瘤大小，并使用標(biāo)準(zhǔn)公式計算體積：寬度的平方乘以長度除以2。每周測量體重。為了研究是否在實(shí)驗(yàn)的早期階段抑制了蛋白酶體，在治療3天后，犧牲一只對照小鼠和一只接受3.0 mg/kg Celastrol雷公藤紅素處理的小鼠。其余小鼠在接受16天的治療后犧牲，此時對照組腫瘤達(dá)到1,400 mm3。在第二個PC-3腫瘤實(shí)驗(yàn)中，接種后的12天，小鼠隨機(jī)分為三組，并分別接受對照、雷公藤紅素Celastrol或Oridonin每日1.5 mg/kg的處理，持續(xù)31天。在另一個實(shí)驗(yàn)中，為了研究雷公藤紅素Celastrol對AR表達(dá)的影響，攜帶C4-2B腫瘤的裸鼠每天腹腔內(nèi)注射處理劑或3.0 mg/kg Celastrol。

大鼠

雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠（n = 90，6周齡），體重161±9克，隨機(jī)分為對照組（NC）和高能量飲食組（HED）。在對照組中，動物接受標(biāo)準(zhǔn)飼料，而HED組的大鼠則額外攝入高能量乳劑。在各自飲食后的8周，將溶解在0.1mol / l檸檬酸緩沖液（pH 4.5）中的鏈脲佐菌素（STZ; 45 mg / kg）注射到HED組的大鼠尾靜脈中，以建立T2DM模型，而對照組的大鼠則注射檸檬酸鈉緩沖液。注射STZ后7天血糖水平≥16.7 mM的大鼠被選作糖尿病模型。平均來說，80％的接受STZ注射的大鼠符合這些標(biāo)準(zhǔn)。在成功誘導(dǎo)糖尿病后的1周，隨機(jī)將大鼠分為糖尿病模型（DM）組、低劑量Celastrol組（1 mg/kg/day）、中劑量Celastrol組（3 mg/kg/day）和高劑量Celastrol組（6 mg/kg/day）（每組15只大鼠）。治療組的大鼠通過灌胃給予Celastrol，而NC和DM組的大鼠則給予相同數(shù)量的蒸餾水（2 mL）。在各自治療8周后，大鼠經(jīng)過腹腔注射戊巴比妥鈉（30 mg/kg體重）麻醉，采集組織樣本進(jìn)行分析。將脊柱旁肌切下，并沿縱軸垂直切割，在磷酸緩沖20％甲醛中固定。然后制備石蠟包埋切片（5μm）進(jìn)行H&E染色。脊柱旁肌的切片被迅速冷凍在液氮中，并存放在-80℃直到進(jìn)一步分析。

MCE未經(jīng)獨(dú)立確認(rèn)這些方法的準(zhǔn)確性，以上僅供參考。