構建嵌合抗原受體(CAR)候選分子時選擇合適抗原結合域的考慮因素

嵌合抗原受體（CAR）是CAR-T/NK細胞的核心所在。一般由胞外抗原結合區(qū)（通常為scFv）、跨膜區(qū)以及胞內(nèi)信號傳導區(qū)構成。CAR候選分子具備特異性識別腫瘤細胞表面抗原的能力，能讓CAR-T/NK細胞及其他經(jīng)CAR修飾的免疫細胞精確地瞄準腫瘤細胞，從而降低對正常細胞的損害。當CAR候選分子與腫瘤抗原相結合后，會激活免疫細胞內(nèi)的信號傳導途徑，推動免疫細胞發(fā)揮殺滅腫瘤細胞的功效。通過選取適宜的CAR候選分子，能夠增強免疫細胞的活化與增殖能力，提升抗腫瘤免疫反應的成效�？傊�，CAR候選分子在腫瘤免疫治療中占據(jù)著舉足輕重的地位，為實現(xiàn)精準、高效的腫瘤治療奠定了重要基石。

選擇合適的抗原結合域是構建CAR候選分子的關鍵步驟之一，需要考慮以下幾個方面：

腫瘤特異性：抗原結合域應能夠特異性地識別腫瘤細胞表面的抗原，而與正常細胞的交叉反應最小化。例如，對于某些血液腫瘤，CD19是一個較為理想的靶點，因為它在B細胞惡性腫瘤中高表達，而在正常造血干細胞中不表達。

親和力和特異性：選擇具有高親和力和特異性的抗原結合域，以確保CAR-T/NK細胞能夠有效地識別和結合腫瘤細胞�？梢酝ㄟ^噬菌體展示、酵母展示或其他技術篩選出具有所需特性的單鏈抗體片段（scFv）。

抗原表達水平：考慮腫瘤細胞表面抗原的表達水平。理想的抗原應該在腫瘤細胞上高表達，以增加CAR-T/NK細胞與腫瘤細胞的結合機會。例如，在某些實體瘤中，HER2等抗原的表達水平可能因腫瘤類型和個體差異而有所不同，因此需要選擇在特定腫瘤中高表達的抗原作為靶點。

腫瘤異質性：腫瘤細胞往往具有異質性，即不同的腫瘤細胞可能表達不同的抗原。因此，選擇的抗原結合域應能夠識別多種腫瘤細胞亞群，以提高治療的效果。例如，在黑色素瘤中，除了常見的靶點如NY-ESO-1外，還可以考慮其他腫瘤相關抗原，以應對腫瘤的異質性。

免疫原性：盡量選擇免疫原性較低的抗原結合域，以減少機體對CAR-T/NK細胞的免疫排斥反應。一些人源化或全人源的抗體片段可能具有較低的免疫原性。

臨床前研究數(shù)據(jù)：參考已有的臨床前研究數(shù)據(jù)，了解不同抗原結合域在動物模型中的療效和安全性。這些數(shù)據(jù)可以為選擇合適的抗原結合域提供重要的參考依據(jù)。

為了助力CAR候選分子的篩選，加速細胞治療研發(fā)進程，逐典生物精心打造CAR候選分子開發(fā)解決方案，服務包括scFv/sdAb 抗體發(fā)現(xiàn)與優(yōu)化、細胞因子序列設計及轉讓授權，助推您快速順利獲得具有合適親和力和高特異性的人源化CAR候選抗體分子和具有特定功能的細胞因子序列。

scFv/sdAb候選分子開發(fā)服務

為了快速且高性價比地獲得合適親和力的CAR候選分子，逐典生物采用噬菌體篩選的方式進行CAR候選分子的篩選，噬菌體篩選具有以下顯著優(yōu)勢：

高效性：能夠在短時間內(nèi)從龐大的抗體庫中篩選出目標分子。

特異性強：可以精確地識別和篩選出針對特定抗原的分子。

庫容巨大：能夠構建包含數(shù)十億甚至更多不同 scFv 的噬菌體庫，大大增加了找到理想抗體的可能性。

易于操作和改造：篩選過程相對簡便，并且可以通過基因工程技術對噬菌體進行修飾和優(yōu)化。

成本相對較低：相較于其他一些篩選技術，噬菌體篩選所需的試劑和設備成本較為經(jīng)濟實惠。

可重復性好：只要遵循相同的操作流程和條件，就能夠獲得較為穩(wěn)定和可重復的篩選結果。

服務流程

以scFv為例，首先構建噬菌體抗體庫：逐典生物擁有全面的免疫原設計&制備平臺以及獨有的六聚體免疫技術，可以顯著增強動物免疫效果，提高免疫效價，為構建高庫容的噬菌體展示文庫打下堅實的基礎。從經(jīng)過免疫的小鼠或羊駝中獲取淋巴細胞，提取RNA并反轉錄為cDNA，通過PCR擴增抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)基因，將其連接成單鏈抗體片段基因并插入噬菌體載體，之后利用目標抗原對噬菌體進行多輪篩選和淘洗，獲得目標分子。逐典生物可提供靈活的體外效價檢測方案和BLI/SPR親和力排序，確保篩選到合適的分子序列。之后根據(jù)具體項目需求進行抗體片段化，人源化基因改造和抗體親和力成熟，重組表達之后交付純化抗體。

服務詳情

CAR候選分子人源化案例分享

項目目的：對篩選到的原始序列進行人源化改造，要求同時獲取親和力保持和親和力降低的人源化序列

項目結果：在客戶要求的交付時間內(nèi)，成功交付親和力保持和親和力降低的人源化序列。

細胞因子序列轉讓&開發(fā)服務

為增強CAR-T細胞療法的效果，一系列創(chuàng)新的CAR設計應運而生，旨在強化抗腫瘤的效率，克服因CAR-T細胞擴增、浸潤和持久性欠佳而產(chǎn)生的治療耐藥性。在此背景下，第四代 CAR（即裝甲型 CAR）正在積極研發(fā)之中，它整合了細胞因子（像 IL-7、IL-15 或者 IL-21 等），用以提升CAR-T細胞的持久性、腫瘤靶向性以及抗腫瘤能力。另外，還有一種策略是通過讓CAR-T細胞表達趨化因子受體或者趨化因子（比如 CCL19、CCL21）來對其進行修飾，引導CAR-T細胞到達腫瘤所在部位。

然而，野生型的細胞因子的一些短板比如無偏向性、構象不穩(wěn)定等限制了細胞激活、擴增的效果甚至是第四代CAR-T分子的構建。為了解決野生型細胞因子的難題，逐典生物依托AI蛋白設計和表達平臺，提供定制化細胞因子開發(fā)和表達服務。此外，逐典生物已對部分常用的野生型的細胞因子序列進行改造，比如，改造后的IL-15 Pro相比野生型，活性可提高20倍。改造后的IL-2 Pro可實現(xiàn)偏向性地結合不同的IL-2受體，從而優(yōu)先激活CD8+T細胞或者優(yōu)先激活Treg細胞，可有效調(diào)控免疫細胞的應答。