Waters2695液相色譜儀操作流程詳細介紹及相關使用注意事項
一、開機前的準備工作：
1．檢查設備電源、流路、信號連接是否完好；
2．流動相：配制相應的流動相，經(jīng)0.22mm微孔濾膜抽真空過濾后，或檢查是否需要添加。適當選擇濾膜，水系/有機系（反光面朝上）。
3．樣品溶液：按方法取樣或配制標準樣品溶液，0.22mm濾膜過濾。
二、開機平衡系統(tǒng)：
1．開機自檢：打開電源開關，儀器開始自檢（4-5min），待屏幕上方出現(xiàn)“Idle”自檢完成。
2．脫氣：按面板右下方“Menu/Status”鍵進入“Status”界面，移動光標至“Degasser Mode”，按Enter選擇“On”，打開在線脫氣。一般默認是開的。
3．設定柱溫：在“Status”界面，光標至“Col Htr Set”，輸入目標溫按Enter。
4．清洗柱塞桿：按“Menu/Status”鍵回到“Menu”界面，按下排功能鍵“Diag”，然后再按下排功能鍵“Prime Seal Wsh”，“Start”，沖洗1~2min后，“HALT”，“CLOSE”。
5．Wet Prime：在“Status”界面中“Composition”下，選擇將用到的溶劑通道為“100%”，按液晶屏幕右下角“Direct Function”鍵，移動光標選擇“Wet Prime”，“OK”，流速及時間可使用默認值，也可自行設定（如：5ml/min，3min），“OK”即可。
將每一個會用到的溶劑通道按照上述操作一次。（也可各通道選25%v 5ml/min，3min）。
6．注射器排氣泡及清洗：進入“Direct Function”界面后，選擇“Purge Injector”，“OK”，默認數(shù)值為6，“OK”。
7．清洗注射針：進入“Diagnostics”界面，按下排功能鍵之“Prime Ndl Wsh”，“Start”，默認30秒鐘，“Close”，即可返回“Diagnostics”界面。
注：以上4-7為溶劑系統(tǒng)前處理過程，建議每天開機后依次進行。若發(fā)現(xiàn)注射器中有氣泡，則可重復6）直至排除。
8．平衡柱子：在“Status”界面上，按流動相比例設定各通道溶劑比例后，再Wet Prime操作一次，然后設置流速，平衡色譜柱30-60min。
三、編輯儀器方法和方法組:
1．打開電腦雙擊桌面上的Empower，輸入用戶名system、密碼manager選擇項目和系統(tǒng)。
2．新建方法與方法組
新建方法：單擊監(jiān)視區(qū)方法組編輯向?qū)?mdash;新建—2695的參數(shù)：單次輸送體積（建議130）、針頭深度0、脫氣設置開、泵模式（等度/梯度）、柱溫。2489配置：通用（燈開啟、波長）—文件—另存為（輸入方法名XX）-保存-退出。
新建方法組：選擇所需的方法名稱，點擊下一步—輸入方法組名（與方法名一致）。
四、進樣：
1．待“監(jiān)視基線”穩(wěn)定后，點擊“中斷樣品組”開關，進入“進樣”階段。
2．當進行單進樣時，在“運行樣品”的“單進樣”界面中輸入“樣品名”“功能”“方法組”“進樣體積”“運行時間”等；“單進樣”就是單次進樣，完成分析后即停止檢測（流動相正常走動）；
3．當多進樣時，在“運行樣品”的“樣品”界面點擊“樣品瓶”輸入所有樣品分別所在位置（輸入所在編號），“進樣體積”、“進樣數(shù)”、“功能”、“方法組”、“運行時間”等。
4．開啟綠色“運行”－“運行樣品”開關。
五、關機：
1．清洗注射器、針、柱塞桿：方法同開機平衡系統(tǒng)中的4-7。
如果流動相中含有鹽類，則實驗結束后必須用水清洗柱塞桿。
2．如果流動相使用了鹽，注意不要讓有機溶劑直接和緩沖鹽接觸，中間要使用水過渡一下。先用水/甲醇（或乙腈）=95/5在1ml/min流速下清洗色譜柱和系統(tǒng)30分鐘，再用甲醇或乙腈清洗30分鐘；如果流動相中沒有使用鹽，則用甲醇或乙腈清洗色譜柱和系統(tǒng)30分鐘。
3．降低流速至0，待系統(tǒng)壓力回零后，退出Empower軟件系統(tǒng)，關閉HPLC系統(tǒng)。最后，關閉計算機及顯示器電源。
六、儀器使用注意事項:
1．水性流動相使用不要超過二天，最好每天新鮮配制以免微生物的生長。
2．樣品組方法里的“功能”一項，有“平衡”及“平衡色譜柱”兩個選項，其功能不同。若儀器方法選用梯度，用“平衡色譜柱”可以在進樣前運行梯度來平衡柱子；而如果選用“平衡”則只是按照初始梯度條件等度平衡柱子。（當然，如果用等度的流動相條件，則兩者沒有區(qū)別）。
3．清洗柱塞桿的溶劑可以用水，或5%-10%甲醇（抑菌）。
4．清洗針的溶劑可以根據(jù)樣品溶解性選擇，如甲醇，或異丙醇-水（1：1）。
5．“實驗結束后要注射器排氣泡及清洗（purge injector）”，1次即可，包括了“purge sample loop”。
6．在線脫氣機打開后，開始時運行加速，壓力很快降到1.0psi以下，然后維持0.5psi左右。
7．懷疑管路堵塞可卸下單向閥和在線過濾器進行清洗。單向閥安裝注意方向（箭頭朝上）。
8．注射器中的氣泡快速有效排除方法：可以小心的卸下注射器抽吸甲醇排除氣泡后，注射器中保留少量溶劑，做“purge injector”小心安裝上，再做幾次“purge injector”觀察沒有氣泡即可。其他方法，可以在“purge injector”開始后、注射器桿向上時，擰掉下邊螺絲，上下抽推排除氣泡，但手動排泡過程要在purge injector結束前完成。溶劑用甲醇較好,不用同時擰掉上方注射器。
9．當有多個“儀器方法”和“方法組”存在時要注意選擇當前需要使用的“儀器方法”和“方法組”；當“儀器方法”改變時尤其是流動相組成等發(fā)生變化時，必須對系統(tǒng)重建平衡，也就是在新的“儀器方法”流動相條件下平衡系統(tǒng)30分鐘以上，使得基線重新穩(wěn)定。
10．長期不使用HPLC，應該將色譜柱從系統(tǒng)拆除，拆除前應該充分平衡色譜柱，一般為用甲醇或乙腈沖洗色譜柱40分鐘以上。
11．若色譜柱長期保存未使用，則剛裝入HPLC系統(tǒng)時應以流量0.2mL/min平衡過夜（注意斷開檢測器避免不必要的檢測器耗損），然后再以0.8mL/min流量平衡30分鐘以上。以低流量緩慢的提高流速直到獲得穩(wěn)定的基線，這樣可以保證色譜柱的使用壽命。當然在分析結束時沖洗色譜柱及系統(tǒng)后停止流量時也應該從高流量逐步過渡到低流量直到流量為0。
12．系統(tǒng)短期不使用，應該在每次使用后沖洗系統(tǒng)30分鐘以上。
