D-螢光素鉀鹽主要應(yīng)用及常見(jiàn)使用問(wèn)題疑惑解答

D-螢光素鉀鹽主要應(yīng)用在哪些方面？
它主要應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。例如在活體動(dòng)物成像中，通過(guò)標(biāo)記細(xì)胞或生物分子，利用其生物發(fā)光特性可以追蹤細(xì)胞的活動(dòng)、監(jiān)測(cè)疾病的發(fā)展等。在基因表達(dá)研究中，可作為報(bào)告基因的底物，通過(guò)檢測(cè)螢光強(qiáng)度來(lái)反映特定基因的表達(dá)水平。此外，在藥物研發(fā)中，可用于評(píng)估藥物的療效和毒性等。

在活體動(dòng)物成像中如何使用 D-螢光素鉀鹽？
首先，要把表達(dá)螢光素酶的細(xì)胞或組織植入活體動(dòng)物體內(nèi)。之后以合適方式（如注射）將 D-螢光素鉀鹽引入動(dòng)物體內(nèi)。過(guò)一定時(shí)間后，用特定成像設(shè)備（如Revvity小動(dòng)物活體成像系統(tǒng)）檢測(cè)螢光素酶催化 D-螢光素鉀鹽產(chǎn)生的光信號(hào)。依據(jù)光信號(hào)的強(qiáng)度和分布等信息，能推斷出標(biāo)記細(xì)胞或組織的位置、數(shù)量等狀況。

使用 D-螢光素鉀鹽有哪些安全注意事項(xiàng)？
D-螢光素鉀鹽通常需在通風(fēng)良好的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境下進(jìn)行操作。操作人員要佩戴合適的防護(hù)裝備，像手套、護(hù)目鏡之類的，以防直接與之接觸。它需妥善保管，規(guī)避受潮、受熱或者受光照等可能對(duì)其穩(wěn)定性產(chǎn)生影響的因素。并且，要依據(jù)相關(guān)規(guī)定處置廢棄物，防止給環(huán)境帶來(lái)污染

如何正確儲(chǔ)存 D-螢光素鉀鹽？
一般建議將D -螢光素鉀鹽儲(chǔ)存在-20℃的環(huán)境中。在這樣的低溫條件下，能夠有效減緩其化學(xué)活性，降低可能的分解或變質(zhì)速度。如果沒(méi)有-20℃的冰箱，也應(yīng)盡量將其儲(chǔ)存在2 - 8℃的冷藏環(huán)境中。雖然這個(gè)溫度不如-20℃理想，但也能在一定程度上延緩其質(zhì)量變化。比如在短期內(nèi)（幾周內(nèi)），如果無(wú)法立即將其轉(zhuǎn)移到-20℃儲(chǔ)存，2 - 8℃冷藏可以作為一個(gè)臨時(shí)的儲(chǔ)存方式。

為什么D-螢光素鉀鹽/鈉鹽要溶于無(wú)Ca²⁺或Mg²⁺的PBS?
1.保護(hù)螢光素酶結(jié)構(gòu)與活性：
螢光素酶的活性部位對(duì)其周圍環(huán)境非常敏感。Ca²⁺和Mg²⁺可能會(huì)與螢光素酶的某些結(jié)構(gòu)域或氨基酸殘基相互作用，影響其正確的空間構(gòu)象。

2. 防止競(jìng)爭(zhēng)性抑制：
在生物發(fā)光反應(yīng)中，螢光素酶與D-螢光素鉀鹽/鈉鹽的結(jié)合及催化反應(yīng)是高度特異性的。Ca²⁺和Mg²⁺可能會(huì)與螢光素酶的活性中心競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合D-螢光素鉀鹽/鈉鹽，從而干擾正常的催化反應(yīng)。

3. 維持細(xì)胞正常生理狀態(tài)：
當(dāng)進(jìn)行涉及細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)時(shí)，細(xì)胞外環(huán)境中的Ca²⁺和Mg²⁺濃度變化可能會(huì)影響細(xì)胞的生理狀態(tài)和功能。

4.確保實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性和可重復(fù)性：
在生物發(fā)光實(shí)驗(yàn)中，準(zhǔn)確測(cè)量螢光強(qiáng)度是關(guān)鍵。如果使用含Ca²⁺或Mg²⁺的PBS溶解D-螢光素鉀鹽/鈉鹽，由于Ca²⁺和Mg²⁺可能與底物或其他實(shí)驗(yàn)體系中的成分發(fā)生未知的反應(yīng)，會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不穩(wěn)定和不可靠。

動(dòng)物對(duì)重復(fù)注射D-螢光素的反應(yīng)如何？
一、急性反應(yīng)
1.局部組織反應(yīng)：
在重復(fù)注射的初期，注射部位可能會(huì)出現(xiàn)一些局部的輕微炎癥反應(yīng)。這是因?yàn)槎啻蔚尼槾毯退幬锎碳��?huì)對(duì)局部組織造成一定的機(jī)械性損傷和化學(xué)刺激。例如，注射部位周圍可能會(huì)有輕度的紅腫，這是由于局部血管擴(kuò)張和組織液滲出引起的。

然而，這種局部的炎癥反應(yīng)通常是暫時(shí)的且相對(duì)較輕，一般不會(huì)對(duì)動(dòng)物的整體健康狀況產(chǎn)生嚴(yán)重影響。隨著時(shí)間的推移和身體的自我修復(fù)，這些局部的紅腫等現(xiàn)象會(huì)逐漸減輕和消失。

2. 整體生理反應(yīng)：
當(dāng)首次注射 D-螢光素后，動(dòng)物體內(nèi)的生理系統(tǒng)會(huì)對(duì)其進(jìn)行代謝和處理。在重復(fù)注射時(shí)，如果間隔時(shí)間較短，動(dòng)物的代謝系統(tǒng)可能尚未完全將前一次注射的 D-螢光素完全代謝清除。

二、中期反應(yīng)（多次重復(fù)注射后數(shù)天到數(shù)周）
1. 代謝適應(yīng)：
隨著重復(fù)注射次數(shù)的增加，動(dòng)物的肝臟和腎臟等主要代謝器官可能會(huì)逐漸適應(yīng)對(duì) D - 螢光素的代謝需求。肝臟中的酶系統(tǒng)可能會(huì)出現(xiàn)一定程度的上調(diào)，以更高效地代謝和清除 D-螢光素。

2. 免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)：
動(dòng)物的免疫系統(tǒng)也可能對(duì)重復(fù)注射的 D-螢光素產(chǎn)生一定的反應(yīng)。在正常情況下，免疫系統(tǒng)會(huì)識(shí)別 D-螢光素為外來(lái)物質(zhì)，但由于其相對(duì)較低的免疫原性，通常不會(huì)引發(fā)強(qiáng)烈的免疫排斥反應(yīng)。

然而，多次注射可能會(huì)導(dǎo)致免疫系統(tǒng)的一些微妙變化。例如，可能會(huì)有少量的免疫細(xì)胞如巨噬細(xì)胞等在注射部位周圍有輕度的聚集，但一般不會(huì)引起明顯的炎癥或免疫損傷。免疫系統(tǒng)會(huì)逐漸對(duì) D-螢光素產(chǎn)生一定的耐受性，將其視為相對(duì)無(wú)害的物質(zhì)進(jìn)行處理。

三、長(zhǎng)期反應(yīng)（多次重復(fù)注射后數(shù)月及以上）
1. 潛在的累積效應(yīng)評(píng)估：
從長(zhǎng)期來(lái)看，如果持續(xù)重復(fù)注射 D-螢光素，需要關(guān)注藥物在體內(nèi)的累積效應(yīng)。雖然動(dòng)物的代謝和排泄系統(tǒng)在不斷地處理 D-螢光素，但如果注射頻率過(guò)高或劑量過(guò)大，仍可能存在藥物在某些組織或器官中緩慢累積的風(fēng)險(xiǎn)。

2. 對(duì)動(dòng)物整體健康和行為的影響：
在長(zhǎng)期重復(fù)注射 D-螢光素且劑量和頻率控制合理的情況下，動(dòng)物的整體健康狀況和行為通常不會(huì)受到顯著影響。動(dòng)物仍然能夠正常進(jìn)食、活動(dòng)和休息，其生長(zhǎng)發(fā)育和繁殖等生理過(guò)程也基本能夠正常進(jìn)行。



逐典D-螢光素鉀鹽優(yōu)勢(shì)
1.高純度（HPLC: ≥99%)
2.優(yōu)異的生物發(fā)光性能
3.高溶解度（>40mg/ml)