胰島素在無血清哺乳動物細胞培養(yǎng)基中的作用
瀏覽次數(shù):492 發(fā)布日期:2024-10-12
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胰島素是由胰島β細胞分泌的一種多肽激素。胰島素在許多細胞活動中發(fā)揮重要作用:如促進糖和氨基酸轉(zhuǎn)運,提高合成代謝降低分解代謝,刺激細胞生長等。重組人胰島素(rhInsulin)系由含有高效表達人胰島素基因的酵母表達系統(tǒng)經(jīng)發(fā)酵、分離和高度純化后經(jīng)凍干制成。由兩條多肽鏈組成,每條多肽鏈由51個氨基酸殘基組成多肽鏈,分子量為5807Da。
胰島素是無血清哺乳動物細胞培養(yǎng)基中的普遍添加物質(zhì),上海惠誠生物提供的重組人胰島素Recombinant Insulin(Cat NO.:GMP-045)屬于GMP級別,可提供g級和kg級包裝。
胰島素在細胞培養(yǎng)時的作用
胰島素作用廣泛,包括調(diào)節(jié)脂肪和蛋白質(zhì)的代謝以及促進細胞生長等。胰島素功能的發(fā)揮源于其對細胞的作用,進而引起組織乃至機體的整體反應(yīng)。一般可將胰島素在細胞水平的作用分為三大類:代謝作用、促生長作用、以及代謝和促生長混合作用。
胰島素在哺乳動物細胞培養(yǎng)中的作用主要是通過結(jié)合和激活I(lǐng)GF-1R。胰島素和相關(guān)的胰島素樣生長因子IGF-i和IGF-ii通過結(jié)合胰島素受體(IR)和1型IGF受體(IGF-1r)作用于細胞,在哺乳動物細胞表面表達。胰島素只有在生理濃度下才能激活I(lǐng)R;高濃度的胰島素通過IGF-1R觸發(fā)有絲分裂效應(yīng),并通過天然IR導(dǎo)致各種效應(yīng)。胰島素通常以每升1到10mg的濃度添加到細胞培養(yǎng)基中,這大約是生理濃度的100倍。
從生理上講,胰島素的作用主要是代謝,而IGF主要是生長因子。重組胰島素以大約100倍的生理濃度添加到哺乳動物細胞培養(yǎng)物中,作為生長因子,具有抗凋亡和有絲分裂作用。
在無血清細胞培養(yǎng)液中,常添加胰島素來維持細胞生長,調(diào)節(jié)細胞對葡萄糖、氨基酸和脂肪酸的攝取、利用和貯存,同時抑制糖原、蛋白質(zhì)和脂肪的分解。
使用說明:
建議將凍干重組人胰島素溶解在無菌0.01M鹽酸中,濃度不低于1mg/ml,以待進一步稀釋至工作濃度。盡可能避免反復(fù)凍融。 復(fù)溶后的重組人胰島素:4℃可穩(wěn)定儲存7-10天;長期保存請分裝后存放于-80℃。
胰島素產(chǎn)品優(yōu)勢如下:
1)GMP級生產(chǎn)管理規(guī)范
2)技術(shù)全線技術(shù)支持
3) 無血清無動物源級別
4) 純度高\生物活性高
5) 蛋白含量經(jīng)過檢測驗證
6)監(jiān)控內(nèi)毒素
胰島素在體外培養(yǎng)細胞的作用:
胰島素在許多細胞活動中發(fā)揮重要作用,是哺乳動物細胞培養(yǎng)基中常用的添加物質(zhì)胰島素能加速葡萄糖的利用和抑制葡萄糖的生成,抑制脂肪的分解,促進脂肪的合成和貯存,促進蛋白質(zhì)的合成,阻止蛋白質(zhì)的分解,促進鉀離子和鎂離子穿過細胞膜進入細胞內(nèi);促進脫氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)及三磷酸腺苷(ATP)的合成。
結(jié)合胰島素在細胞里的作用,它可以降低蛋白降解;降低脂肪降解;增加氨基酸的攝入;增加鉀元素的攝入;增加葡萄糖的攝入,就是葡萄糖進入細胞,提供能量什么的.所以總體來說就是保持細胞的活性。
胰島素主要作用在肝臟、肌肉及脂肪組織,控制著蛋白質(zhì)、糖、脂肪三大營養(yǎng)物質(zhì)的代謝和貯存。
(1)對糖代謝的影響。能加速葡萄糖的利用和抑制葡萄糖的生成,即使血糖的去路增加而來源減少,于是血糖降低。
①加速葡萄糖的利用。胰島素能提高細胞膜對葡萄糖的通透性,促進葡萄糖由細胞外轉(zhuǎn)運到細胞內(nèi),為組織利用糖提供有利條件,又能促進葡萄糖激酶(肝內(nèi)) 和己糖激酶(肝外)的活性,促進葡萄糖轉(zhuǎn)變?yōu)?磷酸葡萄糖,從而加速葡萄糖的酵解和氧化;并在糖元合成酶作用下促進肝糖元和肌糖元的合成和貯存。
②抑制葡萄糖的生成,能抑制肝糖元分解為葡萄糖,以及抑制甘油、乳酸和氨基酸轉(zhuǎn)變?yōu)樘窃瑴p少糖元的異生。
(2)對脂肪代謝的影響。促進脂肪的合成和貯存,抑制脂肪的分解。糖尿病時糖代謝障礙,脂肪大量動員,產(chǎn)生大量游離脂肪酸在肝臟氧化至乙酰輔酶A,然后變?yōu)橥w,若酮體產(chǎn)生過多則出現(xiàn)酮血癥。胰島素能抑制脂肪分解,并促進糖的利用,從而抑制酮體產(chǎn)生,糾正酮血癥。
(3)對蛋白質(zhì)代謝的影響。促進蛋白質(zhì)的合成,阻止蛋白質(zhì)的分解。
(4)胰島素可促進鉀離子和鎂離子穿過細胞膜進入細胞內(nèi);可促進脫氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)及三磷酸腺苷(ATP)的合成。
另外,葡萄糖在紅細胞及腦細胞膜的進出,葡萄糖在腎小管的重吸收以及小腸粘膜上皮細胞對葡萄糖的吸收,都不受胰島素的影響。胰島素作用的靶細胞主要有肝細胞、脂肪細胞、肌肉細胞、血細胞、肺臟和腎臟的細胞、睪丸細胞等。