Baricitinib巴瑞替尼

Baricitinib巴瑞替尼 （LY3009104; INCB028050） 是選擇性，可口服的 JAK1 和 JAK2 抑制劑，IC50 分別為5.9 nM 和 5.7 nM。

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Baricitinib巴瑞替尼的生物活性

體外研究

在基于細(xì)胞的檢測中，Baricitinib巴瑞替尼 （INCB028050）被證明是JAK信號通路和功能的有效抑制劑。在PBMCs中，Baricitinib巴瑞替尼抑制il -6刺激的典型底物STAT3的磷酸化（pSTAT3）和隨后的趨化因子MCP-1的產(chǎn)生，IC50值分別為44 nM和40 nM。在分離的naive t細(xì)胞中，INCB028050也能抑制IL-23刺激的pSTAT3 （IC50=20 nM）。重要的是，這種抑制抑制了Th17細(xì)胞產(chǎn)生的兩種致病細(xì)胞因子（IL-17和IL-22），其IC50值為50 nM。Th17細(xì)胞是一種輔助T細(xì)胞的亞型，具有明顯的炎癥和致病特性。與之形成鮮明對比的是，結(jié)構(gòu)相似但無效的JAK1/2抑制劑INCB027753和INCB029843在濃度高達(dá)10 μM[1]時對這些檢測系統(tǒng)沒有顯著影響。[]

MCE尚未獨(dú)立證實(shí)這些方法的準(zhǔn)確性。僅供參考。

體內(nèi)研究

Baricitinib巴瑞替尼 (INCB028050) 處理在 2 周處理期間以 1 mg/kg 的劑量抑制后爪體積增加 50%，以 3 或 10 mg/kg 的劑量抑制 >95%。由于基線爪體積測量是在處理第 0 天進(jìn)行的-在具有明顯疾病跡象的動物中-有可能在動物中具有 >100% 的抑制，顯示出腫脹的顯著改善[1]。

Baricitinib巴瑞替尼 (0.7 mg/kg/天) 處理的小鼠表現(xiàn)出顯著減少的炎癥 (通過 H&E 染色評估)、CD8 浸潤減少以及 MHC I 類和 II 類表達(dá)減少。CD8+NKG2D+ 細(xì)胞是小鼠和人類斑禿 (AA) 疾病的關(guān)鍵效應(yīng)細(xì)胞，與載體對照小鼠相比，Baricitinib巴瑞替尼 處理的小鼠顯著減少[2]。

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實(shí)驗(yàn)參考方法

細(xì)胞試驗(yàn)[1]

為了測定il -6誘導(dǎo)的MCP-1的產(chǎn)生，PBMCs在RPMI 1640+10% FCS中每孔3.3×105 cell電鍍，在不同濃度的INCB028050 （1 nM、10 nM、100 nM、1 μM和10 μM）存在或不存在的情況下進(jìn)行。在室溫下與復(fù)合物預(yù)孵育10分鐘后，每孔加入10 ng/mL人重組IL-6刺激細(xì)胞。細(xì)胞在37°C, 5% CO2孵育48小時。收集上清液，用ELISA法分析人MCP-1的水平。據(jù)報(bào)道，INCB028050抑制il -6誘導(dǎo)的MCP-1分泌的能力為50%抑制所需的濃度（IC50）。使用Cell-Titer Glo[1]對Ba/F3-TEL-JAK3細(xì)胞進(jìn)行3 d以上的增殖。[1]

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動物實(shí)驗(yàn)[1][2]

老鼠[1]

雌性大鼠（每組性別n=6只）給予10 mg/kg的Baricitinib巴瑞替尼，并以10 mL/kg的劑量灌胃。前3只大鼠在給藥前0、2、8、24 h放血，后3只大鼠在給藥后1、4、12 h放血。用EDTA作為抗凝劑，樣品離心獲得血漿。已經(jīng)開發(fā)了一種定量測定INCB028050的分析方法，并用于毒理學(xué)研究樣品的分析。該方法結(jié)合了10%甲醇在乙腈中沉淀提取蛋白質(zhì)和LC/MS/MS分析。該方法使用0.1 mL研究樣品，在1-5000 nM范圍內(nèi)具有線性關(guān)系。使用分析師1.3.1處理數(shù)據(jù)。使用加權(quán)線性回歸（1/x2）從峰面積比與濃度之間確定標(biāo)準(zhǔn)曲線。

老鼠[2]

實(shí)驗(yàn)采用AA的C3H/HeJ移植受體小鼠模型。簡單地說，將自發(fā)脫發(fā)的C3H/HeJ小鼠的脫發(fā)皮膚移植到8-10周無疾病的C3H/HeJ小鼠上。在移植時，植入一個滲透泵，給予約0.7 mg/天的Baricitinib巴瑞替尼或安慰劑。滲透泵每月更換一次。對間隔截尾數(shù)據(jù)進(jìn)行了時間-事件生存分析。R中的生存和間隔包用于執(zhí)行l(wèi)og-rank測試。（n=10） baricitinib治療的小鼠和（n=10）安慰劑治療的小鼠的生存分布相等的假設(shè)在5%水平上被拒絕，使用Sun的分?jǐn)?shù)執(zhí)行一個精確的log-rank - two-sample檢驗(yàn)，p值為0.0035。

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參考文獻(xiàn)

[1]. Fridman JS, et al. Selective inhibition of JAK1 and JAK2 is efficacious in rodent models of arthritis: preclinical characterization of INCB028050. J Immunol. 2010 May 1;184(9):5298-307.

[2]. Jabbari A, et al. Reversal of Alopecia Areata Following Treatment With the JAK1/2 Inhibitor Baricitinib巴瑞替尼. EBioMedicine. 2015 Feb 26;2(4):351-5.