細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的多種污染類(lèi)型及其拯救方法

1 細(xì)菌污染
1.1 細(xì)菌污染的鑒別
細(xì)菌污染是細(xì)胞培養(yǎng)當(dāng)中最常出現(xiàn)的污染類(lèi)型，槍頭不小心碰到瓶壁、手不小心從培養(yǎng)瓶口處穿過(guò)、培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)瓶等等，不經(jīng)意的一個(gè)小動(dòng)作，都可能會(huì)造成細(xì)菌污染，以致于實(shí)驗(yàn)前功盡棄。 細(xì)菌污染在沒(méi)有爆發(fā)或培養(yǎng)體系中含有雙抗時(shí)，細(xì)菌污染較容易被科研工作者忽視，黑點(diǎn)在顯微鏡下一穿而過(guò)，小黑點(diǎn)因?yàn)閿?shù)量少且移動(dòng)迅速而不易發(fā)現(xiàn)。隨著細(xì)菌在培養(yǎng)體系中的增多或者體系中撤掉雙抗以后，細(xì)菌可以從鏡下明顯識(shí)別，會(huì)呈現(xiàn)黑色條狀、棒狀、球狀， 培養(yǎng)基的外觀也會(huì)發(fā)生明顯的變化，培養(yǎng)基變渾濁，有細(xì)沙狀沉淀，有時(shí)會(huì)伴有臭味。

1.2 細(xì)菌污染的解決方式
一般的細(xì)胞培養(yǎng)體系中，普遍采用雙抗或者三抗進(jìn)行細(xì)菌的預(yù)防，但這兩者存在一定的局限性，比如只能預(yù)防，而不能拯救已經(jīng)細(xì)菌污染的細(xì)胞。另外，很多科研工作者從事原代的細(xì)胞分離和培養(yǎng)工作，在從動(dòng)物身上取材并分離培養(yǎng)的過(guò)程中，極易造成細(xì)菌污染，如果只是加入雙抗或三抗進(jìn)行沖洗組織，細(xì)菌污染無(wú)法避免，造成了珍貴動(dòng)物組織的浪費(fèi)。

細(xì)胞污染高效清除劑
iCell 細(xì)胞污染高效清除劑，不僅兼具雙抗或三抗預(yù)防細(xì)菌的功效，還可以清除支原體污染，有效消除真菌和細(xì)菌的污染，只需 1-3 天就可顯著抑制支原體、真菌、細(xì)菌的增殖， 本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)了上百種細(xì)胞的測(cè)試和長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，完美兼具高效和廣譜清除細(xì)胞污染物的能力，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)幾乎無(wú)影響，大程度上挽救您的細(xì)胞。

2.真菌污染
2.1 真菌污染的鑒別
實(shí)驗(yàn)室污染的真菌一般為三類(lèi)：念珠菌、酵母菌、霉菌，細(xì)胞污染真菌通常不易察覺(jué)，只有霉菌會(huì)逐漸出現(xiàn)細(xì)絲團(tuán)狀漂浮物，較容易從外觀發(fā)覺(jué)污染，其他真菌污染不像細(xì)菌污染培養(yǎng)基會(huì)渾濁，污染后培養(yǎng)液清澈透亮，與未污染的細(xì)胞從外觀上看無(wú)明顯變化。
在顯微鏡下比較容易判斷污染類(lèi)型，念珠菌呈卵圓狀，在細(xì)胞周邊生長(zhǎng)，酵母菌出芽生殖時(shí)有明顯的一大一小連體結(jié)構(gòu)，霉菌可觀察到菌體，菌絲呈絲狀、管狀、樹(shù)枝狀。

2.2 真菌污染的解決方式
真菌污染由于不容易通過(guò)培養(yǎng)基的變化來(lái)判斷，一般發(fā)現(xiàn)時(shí)就是已經(jīng)爆發(fā)了，鏡下會(huì)出現(xiàn)明顯團(tuán)狀或黑色絲狀污染物，細(xì)胞狀態(tài)明顯變差，很難救活。傳統(tǒng)的預(yù)防真菌污染的方式為培養(yǎng)體系中加入三抗，但是一旦發(fā)生真菌污染，三抗對(duì)于明顯的真菌污染就顯得心有余而力不足，此時(shí)建議如果是還留存種子的細(xì)胞就立刻扔掉，徹底消毒滅菌細(xì)胞房和 CO2 培養(yǎng)箱，扔掉可能被污染的培養(yǎng)基，對(duì)用過(guò)的實(shí)驗(yàn)器材進(jìn)行滅菌。

真菌清除劑
真菌清除劑用于防止細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的真菌（包括酵母）污染，還可用于消除細(xì)胞培養(yǎng)物中的真菌（含酵母）污染。療效遠(yuǎn)超真菌抗生素兩性霉素 B，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的真菌污染，如白色念珠菌、曲霉、酵母有很好的療效。
真菌清除試劑經(jīng)過(guò)了上百種細(xì)胞的測(cè)試和長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，只需 1-3 天就可以抑制真菌增長(zhǎng)。對(duì)細(xì)胞基本無(wú)害，具有高效、特異性殺滅的特點(diǎn)，大程度上挽救珍貴的細(xì)胞，減少真菌污染帶來(lái)的損失。

3 黑膠蟲(chóng)污染
3.1 黑膠蟲(chóng)污染的鑒別
“黑膠蟲(chóng)”是一種常見(jiàn)的細(xì)胞污染物，與細(xì)胞共生，隨細(xì)胞傳代而傳代。“黑膠蟲(chóng)”與細(xì)胞競(jìng)爭(zhēng)性生長(zhǎng)，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)不利，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致細(xì)胞死亡。目前很多細(xì)胞存在被“黑膠蟲(chóng)”污染的現(xiàn)象，對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)及其后續(xù)實(shí)驗(yàn)造成了極大地影響。

“黑膠蟲(chóng)”污染的細(xì)胞常見(jiàn)的特性有以下幾點(diǎn)：
（1）培養(yǎng)基不渾濁，但在顯微鏡下觀察細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞周?chē)�和培養(yǎng)液中有很多“小黑點(diǎn)”， 且隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)“小黑點(diǎn)”逐漸增多，更換培養(yǎng)液或洗滌細(xì)胞不能將其去除；
（2）“黑膠蟲(chóng)”污染的細(xì)胞，營(yíng)養(yǎng)消耗快，需要頻繁更換培養(yǎng)液；
（3）“黑膠蟲(chóng)”污染的細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，細(xì)胞狀態(tài)差，空泡化嚴(yán)重，甚至還可能導(dǎo)致細(xì)胞形態(tài)的改變。

3.2 黑膠蟲(chóng)污染的解決方式
對(duì)于黑膠蟲(chóng)污染的細(xì)胞，最為快速有效的處理方式就是采用黑膠蟲(chóng)清除劑對(duì)黑膠蟲(chóng)進(jìn)行清除，同時(shí)確保培養(yǎng)體系中的血清必須為無(wú)黑膠蟲(chóng)和原蟲(chóng)污染的優(yōu)質(zhì)血清。

黑膠蟲(chóng)清除劑
黑膠蟲(chóng)清除試劑用于清除細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的“黑點(diǎn)”，只需 1-3 天就可以顯著抑制“黑點(diǎn)”生長(zhǎng)，一周左右即可清除“黑點(diǎn)”。

本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)了上百種細(xì)胞的測(cè)試和長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)無(wú)明顯影響，具有高效、特異性殺滅的特點(diǎn)，可顯著清除黑膠蟲(chóng)污染，大程度上挽救珍貴的細(xì)胞。

黑膠蟲(chóng)清除案例

4 支原體污染
4.1 支原體污染的鑒別
支原體直徑約為 0.1-0.3 μm，具有變形能力，可透過(guò)常見(jiàn)過(guò)濾膜（0.22-0.45 μm），因此常規(guī)的無(wú)菌過(guò)濾方法不能將其去除，常用的抗生素也對(duì)支原體無(wú)效。

支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域的一個(gè)世界性問(wèn)題，世界各國(guó)細(xì)胞系支原體污染的平均比例為 30-60%。支原體可通過(guò)細(xì)胞之間交叉污染，操作人員的口腔、皮膚造成污染，或者血清等添加物而帶入污染。

支原體在光學(xué)顯微鏡下不可見(jiàn)，一般不會(huì)引起培養(yǎng)物混濁，因此細(xì)胞被支原體污染一般難以察覺(jué)。

支原體會(huì)消耗必須氨基酸，影響細(xì)胞生長(zhǎng)速率，促進(jìn)代謝物積累，改變細(xì)胞形態(tài)，影響 DNA、RNA 以及蛋白質(zhì)的合成，抑制細(xì)胞因子表達(dá)，改變被污染細(xì)胞的基因表達(dá)譜，誘導(dǎo)染色體畸變。