阪崎腸桿菌及實時熒光定量PCR檢測

一、阪崎腸桿菌是腸桿菌科的一種:

1980年由黃色陰溝腸桿菌更名為阪崎腸桿菌。阪崎腸桿菌能引起嚴重的新生兒腦膜炎、小腸結(jié)腸炎和茵血癥，死亡率高達50% 以上。目前，微生物學家尚不清楚阪崎腸桿菌的污染來源，但許多病例報告表明嬰兒配方粉是目前發(fā)現(xiàn)的主要感染渠道。阪崎腸桿茵的生物學性狀及其對人群的健康危害受到人們的關(guān)注并被報告。例如，味全配方奶粉2008年年10月份被檢出含有致病菌阪崎腸桿菌。

阪崎腸桿菌是奶粉(乳)制品中新發(fā)現(xiàn)的一種致病菌。由其引發(fā)的嬰兒、早產(chǎn)兒腦膜炎、敗血癥及壞死性結(jié)腸炎散發(fā)和暴發(fā)的病例已在全球相繼出現(xiàn)。多份研究報告表明嬰兒配方奶粉是當前發(fā)現(xiàn)致嬰兒、早產(chǎn)兒腦膜炎、敗血癥和壞死性結(jié)腸炎的主要感染渠道,在某些情況下，由阪崎腸桿菌引發(fā)疾病而導致的死亡率可達40%～80%。阪崎腸桿菌已引起世界多國相關(guān)部門的重視。據(jù)報道,國外乳業(yè)巨頭曾因此被召回.在美國FDA2002年在本土某一些國際乳業(yè)巨頭生產(chǎn)的嬰兒配方奶粉中檢出阪崎腸桿菌后，2003年又一家國際乳業(yè)巨頭公司主動召回在美國生產(chǎn)的一批檢出極微量阪崎腸桿菌的罐裝早產(chǎn)兒特殊配方奶粉，阪崎腸桿菌從此成為世界矚目的焦點。但是國內(nèi)企業(yè)鮮有自查能力,原因是國內(nèi)以前還沒有專門的檢測手段,而去買一套以前國內(nèi)從未有過的檢測設(shè)備也不是馬上就可辦到的。目前,國外 奶粉(乳)制品巨頭卻擁有檢測手段,惠氏中國宣稱保證在中國銷售的每一個產(chǎn)品都經(jīng)過了阪崎腸桿菌的檢測才上市。同樣宣稱設(shè)有此檢測設(shè)備的企業(yè)還有美贊臣中國公司。

在國外發(fā)現(xiàn)的奶粉中的阪崎腸桿菌并非有其特定的區(qū)域局限性，中國奶粉企業(yè)又面臨一項大難題。

2005年5月20日，由中國檢驗檢疫科學研究院和天津出入境檢驗檢疫局牽頭完成的《奶粉中阪崎腸桿菌檢測方法》行業(yè)標準在京通過了審定。這項標準的出臺，解決了我國檢測嬰幼兒配方奶粉中阪崎腸桿菌無標準、無檢測方法的問題。10月該標準被實施。

該標準建立了阪崎腸桿菌的改進的傳統(tǒng)檢測方法、普通PCR方法和熒光PCR方法。

據(jù)了解，阪崎腸桿菌是乳制品中近幾年新發(fā)現(xiàn)的一種致病菌。它是存在自然環(huán)境中的一種“條件致病菌”，已被世界衛(wèi)生組織和許多國家確定為引起嬰幼兒死亡的重要條件致病菌，可導致任何年齡層人群的疾病，尤其是對早產(chǎn)兒、出生體重輕的嬰兒或免疫受損嬰兒的威脅最大，嚴重者可導致敗血癥、腦膜炎或壞死性小腸結(jié)腸炎。

繼美國FDA2002年在本土某一些國際乳業(yè)巨頭生產(chǎn)的嬰兒配方奶粉中檢出阪崎腸桿菌后，2003年又一家國際乳業(yè)巨頭公司主動召回在美國生產(chǎn)的一批檢出極微量阪崎腸桿菌的罐裝早產(chǎn)兒特殊配方奶粉，此后成為世界關(guān)注的焦點。我國在2005年5月通過《奶粉中阪崎腸桿菌檢測方法》行業(yè)標準的審定，對奶粉嚴查此菌。

今年以來，廣州、中山、汕頭檢驗檢疫部門在食品工業(yè)用進口奶粉中已多次檢出阪歧腸桿菌。

二、控制阪崎腸桿菌危險的幾點建議

(1)制定嬰幼兒配方奶粉中阪崎腸桿菌微生物標準，建立有效控制措施，將其危險性降低到最低。

(2)制定加工、使用和操作嬰幼兒配方食品的導則，研究降低阪崎腸桿菌污染水平的方法，在生產(chǎn)環(huán)境和配方奶粉中降低阪崎腸桿菌的濃度和流行的危險性；為高危人群生產(chǎn)較大比例的商業(yè)無菌配方替代產(chǎn)品。

(3)制定有效的環(huán)境監(jiān)測計劃，將腸桿菌科而不是大腸桿菌作為工業(yè)生產(chǎn)線的衛(wèi)生指標菌。

(4)建立實驗室監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)，對阪崎腸桿菌的來源、傳播途徑等進行調(diào)查研究；加強相關(guān)學科的基礎(chǔ)研究，包括生態(tài)學、分類學、菌株毒力等。

(5)用商業(yè)無菌液體或開水沖調(diào)配方食品，喂養(yǎng)嬰幼兒后剩余的調(diào)配食品應(yīng)放置冰箱保存，并在食用前再加熱。我國應(yīng)根據(jù)實際情況制定相應(yīng)管理辦法，加強對阪崎腸桿菌的檢測技術(shù)及控制技術(shù)研究，進一步完善嬰幼兒配方食品標準，以保證我國廣大嬰幼兒群體的健康與安全。

三、阪崎腸桿菌檢測必備儀器--熒光pcr儀：

實時熒光定量PCR檢測系統(tǒng)也叫實時熒光定量核酸擴增檢測系統(tǒng)(英文全名是Real-time Quantitative PCR Detection System)，簡稱實時熒光qPCR，qPCR的核心是實時熒光定量PCR儀及與其配套的檢測分析軟件系統(tǒng)。

聚合酶鏈式反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction簡稱PCR)原理憑借敏感、特異、快速的特點榮獲1993年諾貝爾化學獎。因其在病原體檢測方面的獨特優(yōu)勢，因而發(fā)達國家在相關(guān)方法和儀器方面的研發(fā)非常快，成為分子生物學診斷的主流，至今仍處于學術(shù)和應(yīng)用前沿，發(fā)展至今已有三代產(chǎn)品：第一代PCR定性檢測技術(shù)及設(shè)備由基因擴增熱循環(huán)儀(DNA Thermal Cycler)+電泳儀+紫外分析儀+定性試劑構(gòu)成；第二代PCR-DNA終點定量技術(shù)及設(shè)備(End-point quantitative PCR detection)由基因擴增熱循環(huán)儀+熒光儀+終點定量試劑構(gòu)成，其又分為終點酶免定量(End-point ELISA-PCR)和終點熒光定量(End-point Flour-PCR)兩種；第三代產(chǎn)品為Real-time qPCR-DNA/RNA實時熒光定量檢測。

qPCR檢測靈敏度高，檢測線性范圍寬，檢測精度和重復性好等突出優(yōu)勢，因此被公認為目前世界用于臨床及科研的最先進核酸分子診斷技術(shù)，被美國FDA承認并推崇。檢測項目包括：食物等病原菌以及疾病病毒等病原體如：乙肝病毒HBV DNA，丙肝病毒HCV RNA，艾滋病病毒HIV RNA，沙眼衣原體CT，淋病雙球菌NG，巨細胞病毒CMV，結(jié)核分支桿菌Mtb、禽流感、阪崎腸桿菌、口蹄疫、新城疫、豬瘟、大腸埃希菌O157∶H7、沙門菌、炭疽芽孢桿菌、胸膜肺炎放線桿菌、寄生蟲病等。

PCR儀的應(yīng)用范圍廣，幾乎所有的生命科學領(lǐng)域都要涉及：食品檢測、臨床檢驗、疾病控制、檢驗檢疫、科研實驗室、食品安全、化妝品檢測、環(huán)境衛(wèi)生等。國內(nèi)多家試劑廠商生產(chǎn)了包括肝炎、性病、優(yōu)生優(yōu)育、呼吸道疾病、禽流感、阪崎腸桿菌、口蹄疫、新城疫、豬瘟、大腸埃希菌O157∶H7、沙門菌、炭疽芽孢桿菌、胸膜肺炎放線桿菌、寄生蟲病等在內(nèi)的數(shù)十種熒光定量PCR試劑盒，購買方便，價格便宜，并獲得了國家相關(guān)認證。

值得一提的是鑒于當前流行病的頻發(fā)以及實時熒光定量PCR技術(shù)的實際應(yīng)用，國內(nèi)外已將實時熒光定量PCR檢測技術(shù)強制應(yīng)用于相關(guān)行業(yè)并相繼制定了國際、國家、及行業(yè)標準作為法律依據(jù)。例如：

SN/T 1632.3-2005 奶粉中阪崎腸桿菌檢驗方法 熒光PCR方法

GB/T 19438.1-2004 禽流感病毒通用熒光RT-PCR 檢測方法

GB/T 19438.2-2004 H5 亞型禽流感病毒熒光RT-PCR 檢測方法

ISO22174-2005 食物病原體PCR檢測方法

相對于價格十分昂貴的進口儀器，選擇質(zhì)量性能與進口儀器相當而售價只有進口儀器三分之一甚至五分之一的優(yōu)質(zhì)國產(chǎn)熒光定量PCR儀是國內(nèi)絕大多數(shù)用戶的必要選擇，也是國家衛(wèi)生主管部門、國家衛(wèi)生部臨床檢驗中心以及國家食品藥品監(jiān)督管理局提倡的；使用質(zhì)量性能與進口儀器相當?shù)膰�產(chǎn)熒光定量PCR儀能為國家節(jié)省大量外匯，使更多的用戶能夠擁有先進的實時熒光定量PCR技術(shù)和設(shè)備，同時還能促進國產(chǎn)儀器的技術(shù)進步、民族產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，利國利民。

西安天隆科技有限公司生產(chǎn)的TL988型實時熒光定量PCR儀經(jīng)過國家藥監(jiān)局指定的、具有國家質(zhì)量檢驗檢疫局認定的具有CNAL全球互認檢測資質(zhì)的檢測中心檢測合格，性能達到同類產(chǎn)品國際先進水平，并通過兩家國家藥物臨床基地臨床試驗，獲得了國家食品藥品監(jiān)督管理局SFDA核發(fā)的醫(yī)療器械注冊證，并符合國家衛(wèi)生部頒發(fā)的《臨床基因擴增檢驗實驗室管理規(guī)范》和《臨床基因擴增檢驗實驗室工作規(guī)范》。

2005年至今我國科研人員圍繞著阪崎氏腸桿菌的分類、致病機理、危害評估、減少污染措施、檢測方法儀器和標準等進行了研究，相關(guān)研究論文包括：

阪崎腸桿菌的生物學性狀與健康危害，裴曉燕，劉秀梅， 中國疾控制中心營養(yǎng)與食品安全所

乳制品中的阪崎腸桿菌可致嬰兒死亡，中國食品產(chǎn)業(yè)網(wǎng) 2008年5月28日10:56

乳品檢測中實時熒光定量PCR儀的研制，彭年才，蘇明權(quán)，張鎮(zhèn)西，中國乳品工業(yè)，CN23-1177/TS200705：62-64；

乳制品中阪崎腸桿菌的快速檢測，彭年才，李明，食品安全導刊，CN11-5478/R 2008.07；

嬰兒奶粉中阪崎腸桿菌及其檢測，彭年才，張鎮(zhèn)西，蘇明權(quán)，中國乳業(yè)，CN 11-4768/S，2008.08。

淺析乳品中高危害食品源性致病菌阪崎腸桿菌的快速檢測，彭年才 內(nèi)蒙古乳業(yè) P18-20, 2008，03

轉(zhuǎn)自：鳳凰網(wǎng)財經(jīng)