滅菌過(guò)程致死率的確定方法

滅菌過(guò)程致死率的確定方法——生物指示物/生物負(fù)載方法

A.1 總則
    本方法結(jié)合了生物指示物對(duì)給定周期的抗力和生物負(fù)載與抗力方面的知識(shí)以建立周期參數(shù)（作用時(shí)間）。使用本方法要求證明產(chǎn)品的生物負(fù)載水平在一定期限內(nèi)保持相對(duì)穩(wěn)定以及生物負(fù)載的抗力小于等于生物指示物的抗力。通過(guò)逐步增加作用時(shí)間和確定周期的滅活率證明生物指示物的抗力。這一比率和生物負(fù)載的菌數(shù)及相對(duì)抗力方面的知識(shí)可用于確定滅菌時(shí)間，從而可以預(yù)測(cè)SAL。
本方法的指南見(jiàn)ISO14161。
A.2 程序
A.2.1 確定產(chǎn)品中最難達(dá)到無(wú)菌的位置。
A.2.2 將生物指示物放置于產(chǎn)品中最難達(dá)到滅菌條件的位置，為滅菌過(guò)程創(chuàng)建監(jiān)測(cè)，包括已知的微生物數(shù)量和已知的對(duì)EO的抗力。如果監(jiān)測(cè)的位置不是最難滅菌的位置，應(yīng)確定其與最難滅菌位置之間的關(guān)系。
使用經(jīng)證明對(duì)滅菌過(guò)程的抗力比產(chǎn)品對(duì)滅菌過(guò)程的抗力大的PCD可滿足本要求。需注意包裝和從PCD中移除滅菌劑的影響。
A.2.3 使用與常規(guī)產(chǎn)品相同的包裝方式對(duì)上述PCD進(jìn)行包裝，并放置于被滅菌物品中。
A.2.4 選擇比常規(guī)條件具有較小致死性的條件將被滅菌物品暴露于EO中（見(jiàn)第8條），使基準(zhǔn)微生物不會(huì)被全部滅活。
A.2.5 在EO作用時(shí)間遞增而其他參數(shù)保持不變之后，使用以下方法之一確定過(guò)程的致死性：
a） 直接列舉（見(jiàn)A.3.1）或
b） 部分陰性法（見(jiàn)A.3.2或A.3.3）或
c） a）和b）的組合方法。
注：部分陰性法采用在部分氣體作用時(shí)間后PCD復(fù)活檢測(cè)中有無(wú)細(xì)菌生長(zhǎng)的方法。根據(jù)這一結(jié)果，可計(jì)算出基準(zhǔn)微生物的滅活率。
A.2.6 根據(jù)產(chǎn)品生物負(fù)載方面的知識(shí)（見(jiàn)ISO11737-1），生物負(fù)載對(duì)滅菌過(guò)程的抗力和基準(zhǔn)微生物的滅活率決定了達(dá)到規(guī)定SAL所需的處理范圍。
A.3 確定過(guò)程致死性
A.3.1 直接列舉
A.3.1.1 采用直接列舉存活微生物創(chuàng)建存活曲線的方法確定滅菌周期的致死性。
A.3.1.2 ISO14161和ISO11138-1：2006 C.3給出了本方法的細(xì)節(jié)。
ISO11138-1：2006 C.3要求至少有五次作用覆蓋以下方面：
a） 一次作用，樣品沒(méi)有暴露于滅菌劑（如：作用時(shí)間為0）；
注：沒(méi)有滅菌劑或由惰性氣體或媒體代替。
b） 至少一次作用，存活菌數(shù)降低至初始菌數(shù)的0.01%（降低4log10）；
c） 至少三次作用，覆蓋作用a）和作用b）之間的時(shí)間段。
A.3.2 部分陰性法，使用Hocomb-Spearman Karber程序（HSKP）
    用于EO滅菌的生物指示物應(yīng)暴露于環(huán)氧乙烷，作用時(shí)間遞增，而其它參數(shù)保持不變。作用后，通過(guò)直接浸于適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基的方法對(duì)測(cè)試樣品進(jìn)行化驗(yàn)。計(jì)算培養(yǎng)后無(wú)菌生長(zhǎng)的樣品占樣品總數(shù)的比率。ISO14161和ISO11138-1：2006 D.3.1給出了本方法的細(xì)節(jié)。
ISO11135-1：2007
ISO11138-1：2006 D.3.1要求至少有五種作用條件覆蓋以下方面：
a） 至少一組樣品，全部測(cè)試樣品顯示有菌生長(zhǎng)；
b） 至少兩組樣品，部分樣品顯示有菌生長(zhǎng)（量子區(qū)）；
c） 至少兩組樣品，顯示無(wú)菌生長(zhǎng)。
    如果各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的樣品數(shù)量相同且時(shí)間間隔恒定，可使用更改的HSKP方法：Limited Hocomb-Spearman Karber程序（LHSKP）。進(jìn)一步信息見(jiàn)ISO11138-1：2006 D.3.2。A.3.3 部分陰性法，使用Stumbo Murphy Cochran程序（SMCP）Stumbo Murphy Cochran程序（SMCP）要求部分陰性范圍內(nèi)有一個(gè)作用時(shí)間的結(jié)果包含時(shí)間t、有菌生長(zhǎng)即陰性的單位數(shù)量r、重復(fù)次數(shù)n、及每次的初始污染菌數(shù)N0。為使用SMCP程序獲取有效數(shù)據(jù)，ISO11138-1：2006 D.3.3要求通過(guò)至少三次部分陰性運(yùn)行的平均數(shù)計(jì)算D值，以對(duì)再現(xiàn)性進(jìn)行確認(rèn)。
進(jìn)一步指南見(jiàn)ISO14161。