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儀器應(yīng)用手冊(cè)Volume 7 | ||
CompresstomeTM應(yīng)用II 基因功能研究:組織學(xué)連續(xù)切片
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關(guān)鍵詞:組織學(xué)(Histology), 基因功能(Gene Function), 免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry), 連續(xù)切片(Serial Sections),振動(dòng)切片機(jī)(Vibratome) | ||
在基因功能的研究中,為了研究某種基因的功能或基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)時(shí)需要同時(shí)在一個(gè)動(dòng)物上對(duì)多個(gè)基因進(jìn)行突變操作。這一類分析兩個(gè)或多個(gè)基因的研究需要結(jié)合基因的原位雜交技術(shù)、基因表達(dá)蛋白的免疫組織化技術(shù)在發(fā)育的器官層面或組織切片的細(xì)胞層面來(lái)觀察突變操作所造成的影響。隨著更加先進(jìn)的儀器的出現(xiàn),研究技術(shù)也在不斷的更新。通過(guò)結(jié)合親脂性染料示蹤、原位雜交、免疫組織化學(xué)和組織學(xué)等多種技術(shù)從同一個(gè)動(dòng)物中最大限度地獲取器官各個(gè)組織層面的結(jié)構(gòu)變化以及基因和蛋白表達(dá)的變化數(shù)據(jù),使得基因敲除、基因表達(dá)與組織學(xué)的數(shù)據(jù)更加緊密的關(guān)聯(lián)起來(lái)。 | ||
通過(guò)親脂性染料示蹤后,將樣本進(jìn)行切片可獲得組織學(xué)切片數(shù)據(jù)。為了獲取厚度均一的連續(xù)切片我們推薦使用Compresstome VF-700振動(dòng)切片機(jī)(Precisionary Instruments Inc., Greenville, North Carolina)。使用這種切片機(jī)使得切片的免疫抗原活性得以保存。冰凍切片機(jī)由于切片過(guò)程中染料泄露的問(wèn)題而不適于此應(yīng)用。 | ||
CompresstomeTM VF 700 | ||
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)示意圖:在同一個(gè)樣本中進(jìn)行如下四個(gè)技術(shù)操作:一、染料示蹤;二、原位雜交顯示mRNA表達(dá);三、免疫組織化學(xué)顯示蛋白的表達(dá);四、組織學(xué)切片顯示原位雜交和免疫織織化學(xué)染色結(jié)果。 |
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注:新一代CompresstomeTM振動(dòng)切片機(jī)通過(guò)瓊脂凝膠將樣本包埋在樣本管中,并施以輕微的壓縮使得組織被固定得更加牢靠,因此獲得更好的切片效果(切片厚度更均一,切片表面更加光滑平整)。 | ||
相關(guān)鏈接:“Combining Lipophilic dye, in situ Hybridization, Immunohistochemistry, and Histology” | ||
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