Nanopro 1000 cIEF immunoassay technology：突破腫瘤干細胞信號通路蛋白研究困局
很多威脅人類生命的惡性腫瘤存在腫瘤干細胞。腫瘤治療有效的病人，在后期出現(xiàn)復發(fā)，很大程度上與腫瘤干細胞未被有效殺傷，及其耐藥性有關。越來越多的臨床科學家發(fā)現(xiàn)，現(xiàn)有的腫瘤治療藥物，可能只對腫瘤細胞自身有效，而對于腫瘤干細胞無效。
近年越來越多的腫瘤臨床醫(yī)生和藥物研發(fā)企業(yè)開始啟動針對腫瘤干細胞新藥物的研發(fā)。但是很快很多研究者遇到了一個難題，腫瘤干細胞資源非常少。與腫瘤細胞系不同，腫瘤干細胞需要從腫瘤病人血液或臨床穿刺組織樣品中分離，一些樣本只能分離到10000以內(nèi)的細胞。之前，藥物開發(fā)者無法找到一種足夠靈敏的蛋白質分析技術，檢測新化合物處理的腫瘤干細胞蛋白質表達量及修飾的改變，尤其是關鍵蛋白的修飾變化。而關鍵蛋白修飾改變通�？梢苑磻杉毎欠駥π碌幕衔镉蟹磻�，是腫瘤干細胞藥物篩選的關鍵環(huán)節(jié)。
2015年1月份英國兩所全球排名前100位的著名大學曼徹斯特大學和格拉斯哥大學，聯(lián)合在國際頂尖雜志Nature發(fā)表了他們在腫瘤干細胞蛋白質修飾變化研究方法的文章。突破了腫瘤干細胞無法有效進行蛋白質修飾分析的瓶頸。
負責這項研究的是曼徹斯特大學血液腫瘤干細胞蛋白質組研究中心和格拉斯哥大學血液腫瘤研究中心。
兩個中心的科學家從慢性髓性白血病病人樣本中，使用流式細胞儀分選得到CD34+CD38−原始祖細胞和CD34+CD38+定向祖細胞，使用達沙替尼和甲磺酸伊馬替尼進行處理，使用Proteinsimple 的Nanopro 1000系統(tǒng)檢測細胞裂解液中蛋白CrkL 修飾圖譜。在文中，作者指出Nanopro 1000 cIEF immunoassay technology 是一種非常有效的，可以定量出每個修飾異構體在總CrkL蛋白中百分比，且重復性非常好技術。后續(xù)作者繼續(xù)使用了1.6ng總蛋白，檢測pS962 PTPRC/CD45和PTPRC/CD45，，發(fā)現(xiàn)CV分別在7.82，4.41，重復性非常好。
Nanopro 1000 cIEF immunoassay technology 是美國proteinsimple公司開發(fā)的，基于毛細管等電聚焦分離，使用獨創(chuàng)蛋白質捕獲技術，結合抗原抗體免疫雜交，實現(xiàn)在納升級反應體系中，對干細胞等微量樣品進行蛋白質修飾圖譜進行解讀。該系統(tǒng)具有全自動化，無需手工操作，可實現(xiàn)19小時內(nèi)對96個樣品進行分析的強大功能。
