PCR Array 常見問題解答
PCR Array FAQ:
- 任何一臺能夠做QPCR的儀器據(jù)能夠做PCRarray嗎？
- QPCR 儀器都可以進行QPCR array的實驗。
- 根據(jù)儀器采用的96孔或者384孔板，分為以下5種板型（plate format）：
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plate format |
Instrument provider |
QPCR instrument model |
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A(384well) |
lifetechnologies |
7900，ViiA7(384 well block) |
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B(96 well) |
lifetechnologies |
7300,7500,7700,7900（standard 96well），ViiA7（standard 96well） |
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C(96 well) |
lifetechnologies |
7500(fast block)，7900HT（fast block），stepone plus，ViiA 7(Fast block) |
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D(96 well) |
Biorad |
iCycler，MyiQ, iQ5 |
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E(96 well) |
Biorad |
CFX96，DNA Engine opticon，opticon 2，Chromo4 |
BioTNT PCR array的適用在哪里？
回答：適用現(xiàn)有的通路研究；
適用少樣本或中等樣本，多基因的QPCR 檢測；
在低樣本或中等樣本的情況下，費用和時間遠小于自行建立QPCR實驗；
使用方便，操作簡單，結(jié)果穩(wěn)定性好；
BioTNT PCR array的優(yōu)點是什么？
Ct值的平均差異只有0.25個循環(huán)；
數(shù)據(jù)分析方便：專用軟件方便數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析
從QPCR 得到實驗數(shù)據(jù)后，如何進行后續(xù)的結(jié)果分析？需要配套的儀器設(shè)備嗎？
回答： 您可以用這個鏈接，http://www.biotnt.com/product/PCR-Array.aspx
點擊分析工具，然后再點擊：分析軟件下載下載后進行分析。不需要特殊的分析儀器。
BioTNT 的PCR array，如果自己使用，需要購買哪些配套產(chǎn)品？
http://www.biotnt.com/product/PCR-Array.aspx
PCR array 產(chǎn)品之外，您應購買以下產(chǎn)品，對PCR array進行配套使用：
PCR array cDNA第一鏈合成試劑盒 A2010B0B03
Real time 染料PCR PreMIX A2010A0112
建議使用高品質(zhì)的抽提試劑盒，推薦型號為：
RNase-Free DNase Set (50)，79254
如果使用其他公司的抽提試劑盒，如Trizol 法抽提試劑盒，能否使用BioTNT的PCR array 產(chǎn)品？
DNA 去除；使用PCR array 產(chǎn)品前，先進行樣本質(zhì)量的驗證。能夠通過樣本質(zhì)量驗證的樣本，可以進行PCR array實驗。
如何進行PCR array 實驗前的樣本質(zhì)量驗證？
PCR array實驗的質(zhì)量，建議在使用前先進行樣本質(zhì)量驗證；
定量與質(zhì)量控制
使用無菌水(RNase-free)稀釋 RNA 樣本，檢測 260 nm 和 280 nm 吸光值，A260/280 應大于 1.8。
使用公式A260× 40 ×稀釋倍數(shù) = XXXXμg/mL 計算 RNA 濃度。
使用瓊脂糖凝膠電泳檢測 RNA 完整性。
建議：RNA 質(zhì)量測定后，逆轉(zhuǎn)錄得到CDNA，建議用多個內(nèi)參基因自行驗證CDNA 質(zhì)量；
biotnt 的樣本質(zhì)量驗證引物套裝，可以在進行QPCR 之前對樣本進行驗證(包含內(nèi)參引物，如human beta actin， GAPDH, 18sRNA等)
基因組DNA污染控制
Array板塊上的GDC(Genomic DNA Control)反應孔專為檢測每個樣品進行qPCR反應時可能存在的基因組DNA污染而設(shè)置。如果該反應孔的CT值小于35，則表明存在可檢測到的基因組DNA污染，應采取措施予以解決。因此，必須從RNA樣品中去除基因組和其他全部殘余污染物。建議采用Qiagen 柱式抽提過程中加入DNAse去除基因組污染。
PCR array 之前購買BioTNT 樣本質(zhì)量驗證引物套裝或者單獨的GDC 引物進行基因組DNA 污染控制的質(zhì)量驗證；驗證結(jié)果CT 值如果小于35，則表明存在可檢測到的基因組DNA污染，應采取措施予以解決。
如何進行樣本的調(diào)平？
PCR array之前，對樣本需要進行調(diào)平。具體調(diào)平方式為：
RNA 含量調(diào)平：實驗樣本的RNA 盡量調(diào)到同一水平；加入RNA 酶free的水，調(diào)整RNA 濃度；
調(diào)平后的樣本：通過內(nèi)參引物進行驗證，根據(jù)CT 值，進行二次調(diào)平。
BioTNT PCR array定制費用如何？
BioTNT PCR array 提供您的定制，僅比預制產(chǎn)品增加了400元/板的定制費用。您可以把您要檢測的指標給我們，然后把您的儀器型號，以及sample 數(shù)量，重復數(shù)量提供給我們，我們?yōu)槟O(shè)置相應的PCR array 形式，并核算相應的費用給您。
BioTNT PCR array的定制，方式靈活，1 plate起訂。
http://www.biotnt.com/product/PCR-Array.aspx，點擊定制服務。
如果我沒有QPCR 儀器，BioTNT 能夠提供什么服務？
BioTNT PCR array service。
http://www.biotnt.com/product/PCR-Array.aspx，點擊service。
