認(rèn)識(shí)熒光顯微鏡的光立方

什么是熒光？

熒光即為物質(zhì)中的電子吸收光的能量由低能狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)楦吣軤顟B(tài)，再回到低能狀態(tài)時(shí)釋放出的光，是非溫度輻射光——冷光。即：物質(zhì)吸收短波光，進(jìn)入激發(fā)態(tài), 發(fā)射出的長(zhǎng)波光。

無(wú)論是物質(zhì)的自發(fā)熒光、熒光染料還是融合表達(dá)的熒光蛋白，均需經(jīng)過(guò)特定波長(zhǎng)的光激發(fā)（激發(fā)光Excitation），電子發(fā)生遷移后，能量損失后，發(fā)出特定長(zhǎng)波長(zhǎng)的光（發(fā)射光Emision），可通過(guò)檢測(cè)系統(tǒng)采集，達(dá)到識(shí)別特定熒光的作用。

什么是熒光光立方？

在熒光顯微鏡觀察和成像中，通過(guò)熒光光立方提供特定波長(zhǎng)的激發(fā)光和對(duì)應(yīng)的長(zhǎng)波長(zhǎng)發(fā)射光，從而通過(guò)肉眼、顯示屏或相機(jī)采集熒光信號(hào)，因此，熒光光立方是決定可以檢測(cè)到何種熒光信號(hào)的關(guān)鍵器件，其特性包含EX：激發(fā)波長(zhǎng)濾光片參數(shù)，EM：發(fā)射波長(zhǎng)濾光片參數(shù)和DM：二分鏡參數(shù)。以Revolve正倒置一體熒光顯微鏡的DAPI光立方為例，EX：385/30，EM：450/50，DM：425。

光源發(fā)出的光經(jīng)過(guò)DAPI EX，得到特定波長(zhǎng)范圍的激發(fā)光，即得到385±15nm的光，特異性地激發(fā)在此范圍內(nèi)才能被激發(fā)的熒光物質(zhì)；DM二分鏡是將激發(fā)光與熒光分離的光學(xué)元件，作為特殊的反射鏡，只反射特定波長(zhǎng)的光，允許所有其它波長(zhǎng)通過(guò)，因此只有>425nm的光能被傳輸?shù)紼M；EM發(fā)射濾光片是將熒光基團(tuán)發(fā)出的熒光與其它背景光分離開(kāi)來(lái)的光學(xué)元件。發(fā)射濾光片通過(guò)二向色鏡傳輸熒光波長(zhǎng)的光，同時(shí)阻擋從激發(fā)光源(從樣品或光學(xué)元件反射)泄漏的所有其它光。發(fā)射光波長(zhǎng)大于EM才能被觀察到，即只有450±25nm范圍內(nèi)的光進(jìn)入檢測(cè)系統(tǒng)。選擇適當(dāng)?shù)腅X，EM濾光片和DM二分鏡能夠幫助研究人員獲得更高的信噪比（S / N）。

Excitation filter (EX)——激發(fā)濾光片工作示意：

Dichroic mirror (DM)二分鏡工作示意：

Emission (EM) filters發(fā)射濾光片工作示意：

Revolve正倒置一體熒光顯微鏡提供6種光立方選擇和個(gè)性化定制服務(wù)，而且通過(guò)iPad Pro和Echo app實(shí)現(xiàn)完全自動(dòng)化切換，光源為高能LED，壽命長(zhǎng)，光漂白小，且無(wú)汞污染風(fēng)險(xiǎn)，濾光片均為Chroma®噴鍍膜濾光片，具有超高透光率，6種光立方的光學(xué)特性如下：

Revolve提供多達(dá)4個(gè)EPI熒光通道和1個(gè)透射光通道，可以實(shí)現(xiàn)5個(gè)通道圖像的自動(dòng)疊加，且在疊加的圖像上，依然可以對(duì)各個(gè)通道的圖像進(jìn)行調(diào)整，為科學(xué)家研究提供了極大的方便性。