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核酸脂質(zhì)納米?破铡瑸V管規(guī)格

瀏覽次數(shù):1208 發(fā)布日期:2021-10-22  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
​在上一期的核酸脂質(zhì)納米粒主題文章中,我們列舉了后處理的步驟及細(xì)節(jié),其中一項(xiàng)關(guān)鍵內(nèi)容——超濾除溶劑——使用的就是市面上較為常見的超濾管。但看似相同的超濾管實(shí)際上有多種規(guī)格,通常以相對(duì)分子質(zhì)量(Dal或kD)來標(biāo)示,如10 kD、50 kD、100 kD等。數(shù)字越大,代表了濾膜的孔徑越大,截留下來的物質(zhì)分子量也相應(yīng)更大。
 
在我們銷售微流控儀器時(shí),就經(jīng)常會(huì)接到客戶的提問:究竟多少規(guī)格的超濾管適合自己制作的核酸脂質(zhì)納米粒呢?同時(shí),我們也發(fā)現(xiàn),盡管有些客戶包裹的是相似長(zhǎng)度的核酸,使用的超濾管規(guī)格卻完全不同。因此在這篇文章中,我們將通過計(jì)算來確定使用的超濾管規(guī)格。

一般而言,為了保證我們需要的物質(zhì)能夠幾乎完全被截留,選用的規(guī)格大小在目標(biāo)物質(zhì)的分子量的1/3甚至1/4較為合適(這是在蛋白組學(xué)、生物化學(xué)等領(lǐng)域的一個(gè)經(jīng)驗(yàn)值,也可根據(jù)實(shí)際產(chǎn)物進(jìn)行調(diào)整)。規(guī)格過大會(huì)導(dǎo)致大部分目標(biāo)產(chǎn)物流失;規(guī)格過小則會(huì)導(dǎo)致超濾時(shí)間急劇增大,這對(duì)于在有機(jī)溶劑中不穩(wěn)定的核酸脂質(zhì)納米粒而言是非常致命的。

確定了規(guī)格大小和目標(biāo)物質(zhì)分子量之間的比例后,下一步需要確定目標(biāo)物質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量。在這里,首先需要明確相對(duì)分子質(zhì)量(
Mr)單位Dal與物質(zhì)的摩爾質(zhì)量(M)單位g/mol之間的關(guān)系。相對(duì)分子質(zhì)量是該分子的質(zhì)量與“一個(gè)12C原子質(zhì)量的1/12”的比值;摩爾質(zhì)量則是單位物質(zhì)的量的物質(zhì)所具有的質(zhì)量——看似非常繞,但實(shí)際上兩者的數(shù)值是相等的。例如膽固醇的摩爾質(zhì)量為386.65 g/mol,而一個(gè)膽固醇分子的相對(duì)分子質(zhì)量也為386.65 Dal,唯一的不同就是摩爾質(zhì)量是一個(gè)宏觀整體的概念,而相對(duì)分子質(zhì)量則需要確定對(duì)象的具體情況,對(duì)于核酸而言就是要確認(rèn)組成核酸的堿基數(shù)量。在氮磷比計(jì)算一文中,我們提到堿基的平均摩爾質(zhì)量為330 g/mol,所以一個(gè)堿基的相對(duì)分子質(zhì)量為330 Dal。

假設(shè)我們的mRNA具有n個(gè)堿基,則其相對(duì)分子質(zhì)量為330n Dal,如果我們希望這個(gè)值為超濾管規(guī)格的3倍,則意味著超濾管的規(guī)格不得大于110n Dal,由此我們就可以得到下方一個(gè)簡(jiǎn)單的表格。


由此我們可以看到,其關(guān)系非常直接明了。在實(shí)際使用過程中,超濾管通常不會(huì)超過100 kD,因此,只要我們的核酸堿基超過909個(gè),便可以使用100 kD的超濾管。當(dāng)然,為了保險(xiǎn)起見,也可以使用50 kD超濾管。需要注意的是,以上均以mRNA為例。如果為短鏈siRNA,通常在一個(gè)納米粒中會(huì)有多個(gè)的siRNA鏈,因而在計(jì)算的時(shí)候要乘以相對(duì)應(yīng)的數(shù)量。

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應(yīng)用范圍


 
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