空間表型分析探索濾泡性淋巴瘤早期臨床失敗的潛在機制

濾泡性淋巴瘤(Follicular lymphoma, FL)是最常見的惰性非霍奇金淋巴瘤，在臨床上存在明顯的異質(zhì)性。一些患者可能進展為早期淋巴瘤或轉(zhuǎn)化為侵襲性淋巴瘤，通常為彌漫性大B細胞淋巴瘤(DLBCL)，預后較差。濾泡淋巴瘤國際預后指數(shù)(FLIPI)，可用于評估患者風險和預測預后，但不能預測區(qū)分哪些患者無法達到EFS12/EFS24（12個月或24個月內(nèi)無發(fā)病癥狀），即早期失敗。目前為止，尚未找到生物標志物可以輔助預測患者是否可以實現(xiàn)EFS12/EFS24。

基于腫瘤微環(huán)境在癌癥治療中的重要作用，梅奧診以及來自美國、意大利、法國中心研究團隊提出腫瘤微環(huán)境中細胞的表型和分布可以預測早期失敗，并且將這些數(shù)據(jù)整合到臨床預后模型中可以改善濾泡性淋巴瘤患者的風險分層的假設(shè)。為此，研究人員結(jié)合CyTOF和CODEX技術(shù)對腫瘤內(nèi)免疫表型進行描繪和鑒別，發(fā)現(xiàn)濾泡內(nèi)CD4表達的缺乏可以預測濾泡性淋巴瘤的早期失敗，結(jié)合FLIPI系統(tǒng)可以提高高�；颊叩淖R別。

研究中共評估了496名患者，通過組織芯片對樣本中的CD4、CD8、FOXP3、CD32b、CD14、CD68、CD70、SIRP-α、TIM3、PD-1和PD-L1進行的檢測。先單獨評估免疫組化檢查結(jié)果的預后價值，然后再聯(lián)合FLIPI進行評估，證實了濾泡內(nèi)CD4 +表達的缺乏是濾泡性淋巴瘤的獨立預后因素。

濾泡內(nèi)CD4 +表達的缺乏是濾泡性淋巴瘤的獨立預后因素

研究團隊進一步使用了CODEX 和CyTOF技術(shù)。從生物學驗證的角度，對患者的腫瘤免疫表型特征和空間定位進行了分析。獲得CODEX實驗數(shù)據(jù)后，結(jié)合機器學習算法對單細胞進行識別，同時標記每個蛋白標志物的表達強度和空間定位。通過無監(jiān)督聚類，鑒定出14個細胞亞群，包括12個免疫細胞群，一個血管細胞群和一個未定義的細胞群。

鑒別出細胞表型后，使用T-SNE進行降維數(shù)據(jù)可視化。結(jié)合免疫熒光圖像發(fā)現(xiàn)，CD3+ CD8+ T細胞大多位于濾泡外；CD3+ CD4+ CD45RO+ 記憶性T細胞主要集中在濾泡內(nèi)，CD3+ CD4+ CD45RO- 非記憶性T細胞則在濾泡外聚集。

為了更深入地了解腫瘤細胞、免疫細胞和其他微環(huán)境成分的空間關(guān)系，再現(xiàn)組織的動態(tài)空間環(huán)境�；�于細胞-細胞接觸的特點，識別出13個細胞鄰域（cellular neiborhood）或細胞社區(qū)（cellular communities）。值得注意的是，在CD4+ 記憶性T細胞富集的細胞社區(qū)中，僅富集激活態(tài)的CD4+ 記憶性T細胞。對比細胞類型和鄰近社區(qū)相對于濾泡的分布，濾泡內(nèi)CD4 + T細胞是激活的、非衰竭效應記憶T細胞。這些細胞在對抗腫瘤的免疫反應中發(fā)揮關(guān)鍵作用。

結(jié)合基因表達譜的結(jié)果和臨床生存數(shù)據(jù)，可以證明濾泡內(nèi)CD4 +表達和腫瘤基因表達譜是濾泡性淋巴瘤的獨立預后因素。綜合濾泡內(nèi)CD4 +表達和FLIPI評分，有可能預測濾泡性淋巴瘤的EFS12/EFS24。

綜上，研究人員使用CODEX技術(shù)對濾泡性淋巴瘤患者樣本中的免疫細胞表型、空間關(guān)系、空間表型進行了深度分析，發(fā)現(xiàn)可以對抗腫瘤的效應記憶T細胞在濾泡內(nèi)富集，并處于激活、非衰竭狀態(tài)，從分子機制層面提供了有效數(shù)據(jù)，支持綜合濾泡內(nèi)CD4 +表達和FLIPI評分作為未來濾泡性淋巴瘤EFS預測指標的可能性。

關(guān)于CODEX

CODEX技術(shù)是由斯坦福大學Garry Nolan教授開發(fā)的新一代空間蛋白組學分析方案，通過將抗體偶聯(lián)上特異性核酸分子條形碼進行互補熒光分子檢測，從而實現(xiàn)在一個切片樣本上多達40個以上靶點蛋白的自動化染色、成像檢測和空間分布數(shù)據(jù)分析，可以很好的解析組織微環(huán)境內(nèi)復雜的細胞組成和空間分布。觀看視頻了解CODEX平臺技術(shù)原理。

[參考信息]
1. Lack of intrafollicular memory CD4+T cells is predictive of early clinical failure in newly diagnosed follicular lymphoma. Blood Cancer Journal volume 11, Article number: 130 (2021).