fluidot自動(dòng)移液工作站在食品中黃曲霉毒素B1檢測（ELISA法）中的應(yīng)用

方案詳情：
一、實(shí)驗(yàn)原理
試樣中的黃曲霉毒素Ｂ１用甲醇水溶液提取，經(jīng)均質(zhì)、渦旋、離心（過濾）等處理獲取上清液。被辣根過氧化物酶標(biāo)記或固定在反應(yīng)孔中的黃曲霉毒素Ｂ1，與試樣上清液或標(biāo)準(zhǔn)品中的黃曲霉毒素Ｂ1競爭性 結(jié)合特異性抗體。在洗滌后加入相應(yīng)顯色劑顯色，經(jīng)無機(jī)酸終止反應(yīng)，于450ｎｍ 或630ｎｍ 波長下檢 測。樣品中的黃曲霉毒素Ｂ１與吸光度在一定濃度范圍內(nèi)呈反比。
二、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
1、試劑和材料：配制溶液所需試劑均為分析純，水為GB／T6682規(guī)定二級水。 按照試劑盒說明書所述，配制所需溶液。 所用商品化的試劑盒需驗(yàn)證合格后方可使用。
2、儀器和設(shè)備：
①fluidot自動(dòng)移液工作站，F(xiàn)DT-M8-4-300
②微孔板酶標(biāo)儀：帶450與630nm（可選）濾光片
③研磨機(jī)
④振蕩器  SPP-SK-500
⑤電子天平：感量0.01g
⑥離心機(jī)：轉(zhuǎn)數(shù)≥6000r/min
⑦快速定量濾紙：孔徑11μｍ
⑧篩網(wǎng)：１ｍｍ～２ｍｍ孔徑
⑨黃曲霉毒素Ｂ１試劑盒及所要求其它儀器
 
三、實(shí)驗(yàn)步驟 （在 20-24℃條件下操作）
1、稱取至少１００ｇ樣品，固體樣品用研磨機(jī)進(jìn)行粉碎，粉碎后的樣品過１ｍｍ～２ｍｍ孔徑試驗(yàn)篩。�。�.０ｇ樣品于５０ｍＬ離心管中；液體樣品�。保埃埃绱郎y樣品搖勻，稱�。�.０ｇ樣品于５０ｍＬ離心管中，加入試劑盒所要求提取液。
2、將處理好的樣品與試劑盒中的96微孔板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)記物試劑、抗體溶液、顯色劑、終止液放置fluidot自動(dòng)移液工作站的托盤與適配器中。
3、儀器自動(dòng)取1個(gè)吸頭吸取標(biāo)準(zhǔn)或處理好的樣品加50ul到各自的微孔中，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)和樣品必須使用新的吸頭。
 
4、儀器自動(dòng)取8個(gè)吸頭吸取稀釋了的酶標(biāo)記物加50ul到微孔板底部，丟棄吸頭。
5、自動(dòng)取8個(gè)吸頭吸取抗體溶液加50ul到每一個(gè)微孔底部，小心地使酶標(biāo)板在平面上做圓周運(yùn)動(dòng)以充分混合。在室溫下（20℃-25 ℃）孵育30分鐘，丟棄吸頭。
 
6、倒出孔中的液體，將微孔架倒置在吸水紙上拍打以保證完全除去孔中的液體。用洗瓶或多通道移液器將 250ul 洗滌緩沖液加入孔中。再次倒出孔中的液體，完全除去孔中的液體，再重復(fù)操作洗滌步驟兩次以上。
7、自動(dòng)取8個(gè)吸頭取基質(zhì)/顯色劑加100ul到微孔中，充分混合并在室溫（20℃-25℃）暗處孵育 15 分鐘，丟棄吸頭。
8、自動(dòng)取8個(gè)吸頭取反應(yīng)終止液加入100ul 到微孔中充分混合�；旌虾迷�450nm處測量吸光度值，以空氣為空白，必須在加入停止液后15分鐘內(nèi)讀取光度值。
 
 
四、結(jié)果
1、酶聯(lián)免疫試劑盒定量檢測的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制
所獲得的標(biāo)準(zhǔn)和樣品吸光度值的平均值除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值再乘以100。因此0標(biāo)準(zhǔn)等于100%并且以百分比給出吸光度值。
 
計(jì)算的標(biāo)準(zhǔn)值繪成為一個(gè)以黃曲霉毒素 B1 濃度（ng/kg）的 半對數(shù)坐標(biāo)系統(tǒng)曲線圖，相對應(yīng)每一個(gè)樣品的濃度（ng/kg）可以從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出。
 
請注意 ：為了獲得樣品中的黃曲霉毒素 B1 的實(shí)際濃度（ng/kg），從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出的濃度值。
 
2、待測液濃度計(jì)算
按照試劑盒說明書提供的計(jì)算方法以及計(jì)算機(jī)軟件，將待測液吸光度代入曲線圖所獲得公式，計(jì)算得待測液濃度（ρ）。
3、結(jié)果計(jì)算
食品中黃曲霉毒素Ｂ１的含量計(jì)算：
 
計(jì)算結(jié)果保留小數(shù)點(diǎn)后兩位。
陽性樣品需用第一法、第二法或第三法進(jìn)一步確認(rèn)。
4、精密度
每個(gè)試樣稱取兩份進(jìn)行平行測定，以其算術(shù)平均值為分析結(jié)果。 其分析結(jié)果的相對相差應(yīng)不大于20％。
5、其他
當(dāng)稱取谷物、堅(jiān)果、油脂、調(diào)味品等樣品5g時(shí)，方法檢出限為１μｇ／kg定量限為３μｇ／kg。 當(dāng)稱取特殊膳食用食品樣品5g時(shí)，方法檢出限為0.1μｇ／kg，定量限為0.3μｇ／kg。