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蛋白質(zhì)與RNA互作研究新技術(shù):RNA親和純化測序(RAP-seq)

瀏覽次數(shù):552 發(fā)布日期:2024-10-10  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責任自負
蛋白質(zhì)和RNA是具有緊密關(guān)系的生物分子,能夠通過物理相互作用參與完成細胞的周期并調(diào)控細胞的生物學過程。如果干擾了它們的正常相互作用,將會導(dǎo)致細胞功能障礙和疾病發(fā)生。因此,研究RNA與蛋白質(zhì)的相互作用對于理解細胞內(nèi)分子機制和相關(guān)疾病的發(fā)病機理具有重要意義。
以蛋白質(zhì)為中心鑒定與蛋白質(zhì)結(jié)合的RNA,傳統(tǒng)的方法是使用特異性抗體進行免疫共沉淀,鑒定出與蛋白質(zhì)結(jié)合的RNA,比如RNA immunoprecipitations(RIP)、Cross-linking and immunoprecipitation(CLIP)。然而,這些傳統(tǒng)技術(shù)的應(yīng)用受限于高質(zhì)量的抗體,但是有些蛋白無法獲得高質(zhì)量的特異性抗體。如果使用標簽抗體就需要對驗材料進行遺傳轉(zhuǎn)化獲得穩(wěn)定的轉(zhuǎn)化材料,并且無法同時對多個RNA結(jié)合蛋白(RNA Binding Protein,RBP)結(jié)合的RNA進行高通量篩選和鑒定,這就限制了RIP和CLIP更廣泛的應(yīng)用。
藍景科信推出一種全新的鑒定與蛋白結(jié)合的RNA技術(shù)平臺:RNA親和純化測序技術(shù)(RNA Affinity Purification Sequencing, RAP-seq該技術(shù)是通過體外蛋白表達技術(shù),表達出帶有標簽的RNA結(jié)合蛋白,然后與RNA在體外進行孵育和結(jié)合,再分離出與目的RBP結(jié)合的RNA,進行建庫與高通量測序,通過生物信息學分析,可以鑒定出蛋白質(zhì)結(jié)合的mRNA、lncRNA等與細胞命運緊密相關(guān)的重要RNA。
RNA親和純化測序(RAP-seq)作為一種新興的技術(shù),不需要針對每個蛋白制備特異性抗體,也無需制備遺傳轉(zhuǎn)化材料,突破了物種的限制,為我們提供了一種有力的手段來探究基因與RNA之間的相互作用,以及這些相互作用如何影響基因的表達和生物學功能,高效助力RNA結(jié)合蛋白(RBP)調(diào)控機制研究。


項目文章(一)
文章標題:Populus euphratica GRP2 Interacts with Target mRNAs to Negatively Regulate Salt Tolerance by Interfering with Photosynthesis, Na+, and ROS Homeostasis
期刊:International journal of molecular sciences
影響因子:4.9
研究使用RNA親和純化測序(RAP-seq)技術(shù)鑒定及揭示了胡楊富含甘氨酸的RNA結(jié)合蛋白PeGRP2與靶向mRNAs相互作用通過影響光合作用、Na+和ROS穩(wěn)態(tài)負調(diào)控灰楊耐鹽性的機制。
 
項目文章(二)
文章標題:Rare variations within the serine/arginine-rich splicing factor PtoRSZ21 modulate stomatal size to determine drought tolerance in Populus
期刊:New Phytologist
影響因子:8.3
通過RNA親和純化測序(RAP-seq)技術(shù)鑒定了與PtoRSZ21直接相互作用的mRNA分子,進而揭示了這一基因如何通過調(diào)節(jié)氣孔大小來增強楊樹的抗旱能力。研究結(jié)果顯示,PtoRSZ21調(diào)控了一系列與氣孔發(fā)育相關(guān)的基因,從而影響了楊樹的水分利用效率和對干旱的耐受度。進一步闡明了PtoRSZ21在調(diào)控特定基因的可變剪接過程中的具體機制。
來源:藍景科信河北生物科技有限公司
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