Sci Adv亮點(diǎn)丨從蛋白相分離中獲得啟示

Sci Adv亮點(diǎn)丨從蛋白相分離中獲得啟示，鐘超組開(kāi)發(fā)出基于哺乳動(dòng)物低復(fù)雜序列蛋白的超強(qiáng)水下粘合材料
 
本文轉(zhuǎn)載自Bio Art, 責(zé)編丨酶美  改編經(jīng)文章作者同意

近年來(lái)，生物科學(xué)家認(rèn)為哺乳動(dòng)物細(xì)胞中廣泛存在著液液相分離（LLPS）現(xiàn)象，細(xì)胞內(nèi)的蛋白分子可以通過(guò)液液相分離形成具有特殊功能的液態(tài)凝結(jié)物（liquidcondensates）【1-3】。很多時(shí)候因?yàn)榈鞍追肿拥耐蛔�，液態(tài)凝結(jié)物會(huì)進(jìn)一步形成和神經(jīng)退行性疾病或其他疾病相關(guān)的病理性淀粉樣蛋白纖維；但是形成淀粉樣蛋白纖維并不一定是病理學(xué)的先兆【4】。實(shí)際上，很多生物大分子，例如中心體【5】，Balbiani體【6】和核淀粉體（A體）【7】，可以通過(guò)LLPS形成區(qū)室化無(wú)膜細(xì)胞器并隨后經(jīng)過(guò)液固相轉(zhuǎn)變的可逆組裝過(guò)程來(lái)調(diào)控細(xì)胞內(nèi)的生理活動(dòng)。盡管這種順序自組裝（sequential assemblies）在生物學(xué)領(lǐng)域的重要性逐漸被發(fā)現(xiàn)并認(rèn)可，但是從生物工程角度利用這種順序自組裝，特別是將其集成到分子材料設(shè)計(jì)研究方面卻幾乎很少探索。從上述細(xì)胞內(nèi)結(jié)構(gòu)的順序自組裝獲取靈感，上�？萍即髮W(xué)的鐘超課題組利用液液相分離以及液固相轉(zhuǎn)變過(guò)程，開(kāi)發(fā)了一種新型的超強(qiáng)水下蛋白粘合材料。該成果于2019年8月23日在 Science Advances 上以題為“Exploiting mammalian low-complexity domains for liquid-liquid phaseseparation–driven underwater adhesive coatings”的論文在線發(fā)表（圖1），該成果為在生物工程和生物材料領(lǐng)域開(kāi)發(fā)和利用基于哺乳動(dòng)物低復(fù)雜序列的液液相分離現(xiàn)象提供了重要的啟示。
    
 
海洋生物分泌的粘合分子材料其水下粘合性能往往和粘合分子本身所經(jīng)歷的一系列動(dòng)態(tài)加工和自組裝過(guò)程息息相關(guān)。而當(dāng)前仿生水下粘合材料的設(shè)計(jì)大多只考慮自然界中生物粘合劑的分子和結(jié)構(gòu)特征，并沒(méi)有針對(duì)自然粘合分子材料的自組裝過(guò)程進(jìn)行仿生，這在很大程度上限制了強(qiáng)力水下粘合材料的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用。上�？萍即髮W(xué)物質(zhì)學(xué)院材料和物理生物部鐘超課題組從生物學(xué)家對(duì)細(xì)胞內(nèi)液液相分離行為的研究中獲得靈感，提出利用液液相分離形成的凝結(jié)體具有水下強(qiáng)吸附特點(diǎn)并結(jié)合淀粉樣蛋白纖維結(jié)構(gòu)的內(nèi)在粘合特征，設(shè)計(jì)了由液液相分離和液固相轉(zhuǎn)變自組裝驅(qū)動(dòng)的超強(qiáng)水下粘合材料，將哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的低復(fù)雜序列蛋白【8】首次應(yīng)用于可控的功能生物材料領(lǐng)域。
在蛋白設(shè)計(jì)環(huán)節(jié)中，該課題組采用了哺乳動(dòng)物細(xì)胞中TDP-43的低復(fù)雜結(jié)構(gòu)域（TLC），同時(shí)為了獲得強(qiáng)大的水下粘性，該團(tuán)隊(duì)進(jìn)一步融合了來(lái)源于海洋生物貽貝的超強(qiáng)足絲粘合蛋白 Mfp5（Mfp5 是使貽貝牢固結(jié)合在海底巖石上的主要界面蛋白之一），最后構(gòu)建成融合蛋白 TLC-M。研究表明 TLC-M 在低溫下會(huì)形成蛋白濃度很高的液態(tài)凝結(jié)體，非常利于界面吸附，同時(shí) TLC-M 經(jīng)過(guò)液固相轉(zhuǎn)變自組裝形成淀粉樣蛋白纖維，從而最終形成水下粘性涂層材料（圖2）。
圖2，基因模塊化構(gòu)建水下粘性材料 TLC-M，利用來(lái)源于生物靈感的液液相分離行為吸附在基底表面，并自組裝形成納米纖維涂層。
 
研究中作者們發(fā)現(xiàn) TLC-M 在低溫下易發(fā)生液液相分離形成液態(tài)凝結(jié)體，得益于極低的表面能，該液態(tài)凝結(jié)體很容易吸附在基底表面，并且層層吸附最后使基底表面完全覆蓋大量的粘合蛋白。而在隨后的組裝過(guò)程中 TLC-M 液態(tài)凝結(jié)體能進(jìn)一步脫水組裝成致密的淀粉樣蛋白纖維網(wǎng)路，因?yàn)槔w維網(wǎng)絡(luò)的高比表面積以及纖維表面存在大量的粘合基團(tuán)，因此形成的粘合涂層能夠牢固地吸附在界面上而不被外力沖散或溶解（圖3）。圖3，重組粘合蛋白 TLC-M 液液相分離和液固相轉(zhuǎn)變自組裝過(guò)程的表征作者還利用原子力顯微鏡球形探針技術(shù)表征了這種超強(qiáng)粘合材料的水下粘性。在酪氨酸酶催化作用下 TLC-M 分子中的酪氨酸部分轉(zhuǎn)化成多巴，最后形成的粘性涂層材料其最強(qiáng)粘合能達(dá)到 48.1 mJ/m2 （是目前基于蛋白分子的最強(qiáng)粘合材料），由于該蛋白分子的順序自組裝驅(qū)動(dòng)力來(lái)源于自身蛋白的核心 α-helix結(jié)構(gòu)及其周圍的疏水殘基相互作用，因而粘合材料可以在高鹽濃度（< 1M）和較寬pH范圍（3 - 5）的濕潤(rùn)或者液體環(huán)境中制備或應(yīng)用。作者還使用了QSense Pro石英晶體微天平儀器，對(duì)1 mg/mL的TLC-M 溶液分別在4°C和25°C背景溫度下，在金芯片表面的吸附量進(jìn)行了研究對(duì)比（Fig G, top）。并采用ΔD/ΔF曲線作圖（Fig G, bottom），研究吸附物質(zhì)的軟硬程度：高的ΔD/ΔF意味著表面吸附了一層較為柔性的材料，低ΔD/ΔF說(shuō)明表面吸附結(jié)構(gòu)更趨于剛性。此外，由于 TLC-M 具有液體特征，有良好的流動(dòng)性，因而這種蛋白不僅可在不同的表面形成涂層，還可以被注射到微管或者微流控管道中等非規(guī)則的三維界面形成均勻的涂層，為實(shí)現(xiàn)涂層的廣泛用途提供了便利。最后，作為水下粘合的一個(gè)重要展示，作者還利用 TLC-M 蛋白的粘性，將該粘合蛋白和聚苯乙烯小球混合后被證明可以用于特氟龍材料裂縫的填補(bǔ)，初步證明了該粘性材料的應(yīng)用潛力（圖4）。圖4，TLC-M 粘合材料的應(yīng)用這項(xiàng)仿生水下粘合蛋白分子研究中，作者除了在分子結(jié)構(gòu)方面試圖模仿大自然的杰作外，還增添了針對(duì)海洋生物粘合劑液液相分離和粘合固化等動(dòng)態(tài)組裝過(guò)程的仿生。此項(xiàng)研究推動(dòng)了對(duì)自然界中海洋生物粘合劑的分泌、自組裝以及粘合等動(dòng)態(tài)過(guò)程的理解，同時(shí)還表明低復(fù)雜結(jié)構(gòu)域的液液相分離和固液相轉(zhuǎn)變可以作為一種新的工程原理來(lái)指導(dǎo)基于蛋白質(zhì)材料和其他生物啟發(fā)系統(tǒng)的設(shè)計(jì)。值得一提的是，最近有研究在海洋生物藤壺分泌的粘合原纖維蛋白質(zhì)中也發(fā)現(xiàn)了低復(fù)雜結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域的作用可能有助于在粘合劑沉積之前形成液液相分離的液態(tài)凝結(jié)物【9】。這些研究發(fā)現(xiàn)以及本研究的結(jié)果表明低復(fù)雜結(jié)構(gòu)域的液液相分離和固液相轉(zhuǎn)變可能是構(gòu)建自然界細(xì)胞結(jié)構(gòu)和生物材料的通用準(zhǔn)則之一。液液相分離是近年來(lái)生物學(xué)領(lǐng)域的熱門(mén)研究方向，生物學(xué)家已在一定程度上理解了生物分子液液相分離機(jī)理和潛在的生物學(xué)功能和意義；本項(xiàng)研究創(chuàng)新性地將其應(yīng)用于生物材料領(lǐng)域，制備了超強(qiáng)的仿生水下粘合材料。該研究因此為生物工程和材料工程的創(chuàng)造性思維打開(kāi)了大門(mén)，使大家能夠看到這些低復(fù)雜結(jié)構(gòu)域的液液相分離和固液相轉(zhuǎn)變?nèi)绾螒?yīng)用于解決材料科學(xué)中的基本問(wèn)題。據(jù)悉，本文第一作者為上科大物質(zhì)學(xué)院 2016 級(jí)博士生崔孟奎，通訊作者為上科大物質(zhì)學(xué)院材料和物理生物部鐘超研究員。課題在開(kāi)展過(guò)程中，得到了中科院上海有機(jī)所生物化學(xué)交叉中心劉聰教授，吉林大學(xué)張俊虎教授及其課題組成員的幫助。電子顯微鏡和原子力顯微鏡表征分別獲得上科大物質(zhì)學(xué)院電鏡中心和分析測(cè)試平臺(tái)的幫助。與本論文相關(guān)的工作已申請(qǐng)國(guó)際專利（PCT/CN2018/101219）。
 
原文鏈接：https://advances.sciencemag.org/content/advances/5/8/eaax3155.full.pdf
 
制版人：小嫻子
 
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