總RNA制備服務(wù)

倍沃擁有專業(yè)的技術(shù)人員，和自主研發(fā)、潔凈車間生產(chǎn)的專利試劑盒，為您提供最可靠的服務(wù)。

由于RNA樣品易受環(huán)境因素特別是RNA酶的影響而降解，提取高質(zhì)量的RNA樣品在生命科研中具有相當(dāng)?shù)奶魬?zhàn)性。RNA提取對樣品的新鮮性要求非常高，獲取樣品后最好立即提取RNA，若無條件立即實驗，應(yīng)于-80℃或液氮中保存樣品，提取時取出樣品后立即在低溫下研磨裂解細(xì)胞，以防RNA降解。

目前普遍使用的RNA提取法有兩種：基于異硫氰酸胍/苯酚混合試劑的液相提取法（即Biozol類試劑）和基于硅膠膜特異性吸附的離心柱提取法。

1、異硫氰酸胍/苯酚混合試劑的液相提取法

試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。細(xì)胞裂解之后要看不見顆粒狀物質(zhì)（結(jié)締組織和骨除外）。在清洗和裂解細(xì)胞時不需要在低溫下操作，及時在操作過程中釋放的內(nèi)源RNase，也會被TRIZOL中的強(qiáng)變性劑所抑制。當(dāng)加入氯仿時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層（無色）主要為RNA，有機(jī)層（黃色）主要為DNA和蛋白質(zhì)。Biomiga提供的Biozol溶液即基本基于這一原理。

2、硅膠膜特異性吸附的離心柱提取法

采用一系列裂解液裂解組織、細(xì)胞，抑制RNA酶，釋放RNA，調(diào)節(jié)結(jié)合條件之后，硅膠膜特異性吸附RNA，多次漂洗去除DNA、蛋白質(zhì)及其他雜質(zhì)，最后經(jīng)低鹽溶液洗脫得到RNA。

溶液的主要成分為胍鹽，對于某些次生物質(zhì)含量豐富的多糖多酚類植物組織，比如棉花和葡萄葉子，Biomiga在常規(guī)胍鹽的基礎(chǔ)上進(jìn)行了改進(jìn)，添加了一些對多糖多酚類物質(zhì)結(jié)合力很強(qiáng)的成分，像Plantaid可以高效結(jié)合多糖多酚，然后在離心的過程中去除。

Biomiga公司提供產(chǎn)品采用離心柱法，操作簡便、快速、不含有毒有害物質(zhì)。其提取步驟分為樣品處理、細(xì)胞裂解、RNA純化三個方面。

實驗步驟：

樣品處理：

樣品材料進(jìn)行破碎（及勻漿）可以提高裂解效率，組織破碎后可以充分與裂解液接觸，利于裂解。不同來源的組織材料，根據(jù)組織成份的差異，樣品處理的方式也有所差異。一般來說，樣品的破碎方式，主要有液氮研磨、勻漿和蛋白酶K消化。

1）植物和真菌:液氮研磨，也可以加入裂解液后快速勻漿；

2）動物組織：勻漿，液氮研磨，加熱，部分組織如肝臟，可加入蛋白酶K進(jìn)行裂解；

3）革蘭氏陰性菌與細(xì)胞：直接裂解；

4）革蘭氏陽性菌酵母：玻璃珠和酶破壁

細(xì)胞裂解：

樣品經(jīng)液氮研磨或勻漿之后，加入裂解液裂解細(xì)胞，抑制RNA酶，釋放RNA，經(jīng)吸附、漂洗、洗脫后得到高質(zhì)量RNA。

RNA純化：

DNA去除可以用DNase I消化，也可以使用Biomiga獨特的DNA Clean Column，可以簡單告訴地去除絕大部分基因組DNA。

服務(wù)內(nèi)容及價格：

我們使用進(jìn)口優(yōu)質(zhì)試劑盒，潔凈空間操作，提取的總RNA可以滿足southern blot以及qPCR等高標(biāo)準(zhǔn)實驗要求，如果您的樣品數(shù)量較多，請聯(lián)系技術(shù)支持人員，享受折扣優(yōu)惠！

服務(wù)說明：

具體問題歡迎與我們技術(shù)人員聯(lián)系400-115-2855。