微量RNA甲基化測序

m6A 是一種常見的 RNA 甲基化修飾方式，研究表明它在調(diào)控基因表達(dá)、剪接、RNA 編輯、RNA 穩(wěn)定性、控制 mRNA 壽命和降解、介導(dǎo)環(huán)狀 RNA 翻譯等方面扮演重要角色。伯豪生物新開發(fā)微量 MeRIP-seq 技術(shù)，利用新的去 rRNA 技術(shù)，可以同時(shí)檢測 mRNA, lncRNA 及 circRNA 甲基化修飾圖譜，幫助研究人員對 RNA 轉(zhuǎn)錄后甲基化修飾圖譜進(jìn)行研究，是表觀轉(zhuǎn)錄組研究的關(guān)鍵技術(shù)。值得關(guān)注的是微量 MeRIP-seq 技術(shù)通過技術(shù)優(yōu)化，大幅降低 MeRIP 的樣本起始要求量，僅 1 -20μg 總 RNA 即可滿足實(shí)驗(yàn)要求。

• 腫 瘤異質(zhì)性： 揭示癌細(xì)胞的 RNA 甲基化圖譜；
• 細(xì)胞分化： 繪制細(xì)胞分化調(diào)控表觀圖譜；
• 免疫微環(huán)境： 免疫細(xì)胞激化、分化等過程的表觀調(diào)控機(jī)制；
• 神經(jīng)科學(xué)： 探究神經(jīng)相關(guān)疾病的分子機(jī)制。

• 低 RNA 起始量的要求；
• 樣本處理經(jīng)驗(yàn)豐富；
• ISO9001 認(rèn)證，Illumina CSPro 認(rèn)證；
• 學(xué)術(shù)界權(quán)威算法和流程；分析內(nèi)容、靈活的定制分析。

• 物種信息：人、大鼠、小鼠
• 樣本要求：組織質(zhì)量為 10-20mg
• 細(xì)胞數(shù)量為 5×106~107
• 測序模式：illumina Hiseq PE150
• 推薦數(shù)據(jù)量：≥6Gb/ 樣本

子宮內(nèi)膜癌（英語：endometrial cancer），指的是源自子宮內(nèi)膜的癌癥。其病因是由于細(xì)胞異常的生長，并且具備了能夠侵襲或擴(kuò)散到身體其他部位的能力。目前的治療以手術(shù)移除子宮為主。通常會一并進(jìn)行雙側(cè)輸卵管及卵巢切除術(shù)（Bilateral Salpingo-oophorectomy，BSO），移除雙側(cè)輸卵管和卵巢。對于較為嚴(yán)重的個(gè)案，放射治療、化療和賀爾蒙療法也需要列入考慮。早期發(fā)現(xiàn)并接受治療的子宮內(nèi)膜癌，未來預(yù)后會較好。在美國，病患的五年存活率超過八成。

為了研究 m 6 A mRNA 甲基化在細(xì)胞增殖和腫 瘤發(fā)生中的作用，作者研究了在甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物（METTL14）存在 R298P 熱點(diǎn)突變的子宮內(nèi)膜癌。作者發(fā)現(xiàn)約 70% 的子宮內(nèi)膜腫 瘤患者表現(xiàn)出 m 6 A 甲基化的減少，推測這可能是由于 METTL14 突變（m6A 的 writer）或 METTL3（m6A 的 writer）的表達(dá)降低所致。上述變化通過激活 AKT 途徑導(dǎo)致子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖和腫 瘤發(fā)生機(jī)率增加。減少 m 6 A 甲基化導(dǎo)致降低 AKT 通路中的起負(fù)調(diào)控作用 PHLPP2 的表達(dá)和 AKT 通路正調(diào)節(jié)因子 mTORC2 的表達(dá)。總之，這些結(jié)果揭示了 m 6 A mRNA 甲基化減少是子宮內(nèi)膜癌中的致癌機(jī)制，并確定了 m 6 A 甲基化可作為 AKT 信號傳導(dǎo)的調(diào)節(jié)劑。

圖 1 AKT 通路相關(guān)基因中腫 瘤組織相對正常組織 m6A 低甲基化

圖 2 m6A 低甲基化介導(dǎo) AKT 通路促進(jìn)癌癥發(fā)生的機(jī)制：m6A 甲基化通常通過促進(jìn) m6A 依賴的 PHLPP2 翻譯和 m6A 依賴的 mTORC2 亞基轉(zhuǎn)錄本降解來減弱 AKT 通路活性。

PHLPP2 磷酸酶的上調(diào)和 mTORC2 激酶的下調(diào)均通過維持 AKT 的去磷酸化而抑制 AKT 活性。m6A 甲基化的減少破壞了這些轉(zhuǎn)錄本的調(diào)控，導(dǎo)致 PHLPP2 表達(dá)降低，mTORC2 表達(dá)增加，AKT 活性增加。

Guo J, Grow E J, Yi C, et al. Chromatin and single-cell RNA-seq profiling reveal dynamic signaling and metabolic transitions during human spermatogonial stem cell development[J]. Cell Stem Cell, 2017, 21(4): 533-546. e6.