法測效靶細胞殺傷——用流式細胞術(shù)

做免疫學特別是腫瘤學實驗，總免不了要測淋巴細胞或其他細胞對腫瘤細胞的殺傷，國外最常用的是Cr51放射實驗，但這個方法在國內(nèi)的不少地方都不能做，而MTT這個方法又太老，而且也不準確，那么替代方法就用流式細胞術(shù)，又方便，又準確。

 

具體參照如下：
1、計數(shù)靶細胞，并加入CFSE，使CFSE終濃度達到2uM,37度30分鐘。
2、拿出后，1000rpm,5min,可隱約看到細胞染成黃色，PBS洗三次
3、與效應(yīng)細胞混培，作用4-6小時。
4、將細胞混合液消化取出，洗二次，PI工作液5ul，避光30分鐘后上流式
5、CFSE，PI雙陽性的細胞為被殺傷的靶細胞，除以靶細胞總數(shù)，即為殺傷率。

注意事項：
1、CFSE及PI的濃度必須注意，寧低勿高，個人感覺，如果標高的話，在4度放一晚好像會好一些
2、必須設(shè)全陰，CFSE單標，PI單標，CFSE＋PI雙標并同步化的靶細胞的參照.
3、作用時間不能太長，不要超過8個小時。

 

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