輕松純化His標(biāo)簽胞外分泌蛋白

從真核細(xì)胞上清液中純化蛋白是一項繁瑣的工作。通常情況下胞外分泌蛋白的濃度很低，且蛋白很容易被細(xì)胞上清液中的蛋白酶降解。
 
當(dāng)然，Cube Biotech實驗室也面臨同樣的問題。然而一天，Cube Biotech的科學(xué)家想到是否我們可以把磁珠直接加入溶液，從平衡體系中分離出帶His標(biāo)簽的蛋白？通過嘗試，整個純化過程變得比以前更加容易。因此，我們開發(fā)了一個新的方法來純化分泌在胞外的His標(biāo)簽蛋白。
 
當(dāng)然，新的方法能夠成功也是因為Cube Biotech所有的親和純化磁珠：NTA，IDA，和新的INDIGO系列產(chǎn)品都可以通過高溫蒸汽滅菌鍋處理。有興趣嘗試我們新方法用于下一次表達(dá)的His標(biāo)簽胞外分泌蛋白？請參看我們?nèi)缦碌牟僮髁鞒獭?BR> 
 

1、拿一小瓶PureCube His標(biāo)簽親和磁珠（Ni-INDIGO、Ni-NTA、Ni-IDA）移去保護液并添加同體積PBS后用高溫蒸汽滅菌處理。

2、在培養(yǎng)瓶中裝入細(xì)胞培養(yǎng)液并接種細(xì)胞。

3、在培養(yǎng)瓶中加入高溫蒸汽處理過的100μl（25%含量）的磁珠到50ml培養(yǎng)液中。磁珠用量也可以通過蛋白表達(dá)量來計算。

4、在培養(yǎng)瓶外貼上磁鐵后按照通常的方法培養(yǎng)細(xì)胞。當(dāng)帶His標(biāo)簽的蛋白分泌到上清液后將會被磁珠捕獲。

5、需要收集蛋白時，將培養(yǎng)液取出并用清洗液清洗固定在培養(yǎng)瓶壁上的磁珠。

6、去掉磁鐵后將磁珠轉(zhuǎn)移到一個干凈的小管內(nèi)。

7、加入洗脫液反應(yīng)后將洗脫液轉(zhuǎn)移到另一個干凈的小管內(nèi)。

8、洗脫液中含有純化出的帶His標(biāo)簽的目標(biāo)蛋白。