大鼠表皮黑色素上皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒使用說明書

產(chǎn)品名稱：大鼠表皮黑色素上皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒
英文名稱：Rat Skin PrimaCell: Normal Melanocytes Epithelial Cells

大鼠表皮黑色素上皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒費(fèi)用利用本公司試劑盒中提供的表皮組織分離體系來分離，EDTA/EGTA處理過的表皮組織能使得表皮組織中黑色素上皮細(xì)胞的一些功能特性發(fā)生改變，從而將黑色素上皮細(xì)胞分離開來。

本試劑盒適用于分離培養(yǎng)大鼠表皮黑色素上皮細(xì)胞。本體系提供了佳的組織分離條件，分離單個細(xì)胞的效率是已出版文獻(xiàn)中所報道的5~6倍。此外，本體系還能保證所分離的細(xì)胞在培養(yǎng)基中具有很高的活性。利用的成纖維抑制體系，可以大程度地降低所培養(yǎng)的黑色素上皮原代細(xì)胞中成纖維細(xì)胞的含量。 大鼠表皮黑色素上皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒適合于培養(yǎng)大鼠表皮黑色素上皮細(xì)胞。本試劑盒包含：

（1）OptiTDSTM大鼠表皮黑色素上皮細(xì)胞組織解離液（3×1ml） （2）大鼠表皮黑色素上皮細(xì)胞組織處理緩沖液（100ml） （3）FibrOutTM大鼠表皮黑色素上皮成纖維抑制劑（1ml（500X）） （4）大鼠表皮黑色素上皮組織洗液（5 x 100 ml） （5）大鼠表皮黑色素上皮細(xì)胞生長因子（1ml500X）及血清（5x10ml） （6）大鼠表皮黑色素上皮細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基（5 x 100ml） （7）大鼠表皮黑色素上皮組織預(yù)備液（1 x 100 ml） （8）大鼠表皮黑色素上皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒使用說明書

技術(shù)傳授:
凍存培養(yǎng)基
大鼠表皮黑色素上皮細(xì)胞培養(yǎng)試劑盒費(fèi)用凍存細(xì)胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)化，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案
以下實(shí)驗方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗方案，必須參閱針對具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計數(shù)器、細(xì)胞計數(shù)儀按照臺盼藍(lán)拒染法或者使用 Countess®自動細(xì)胞計數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低  1°C。或者，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。