English | 中文版 | 手機(jī)版 企業(yè)登錄 | 個(gè)人登錄 | 郵件訂閱
當(dāng)前位置 > 首頁 > 技術(shù)文章 > 血漿中ctDNA甲基化數(shù)字PCR檢測(cè)攻略-Naica數(shù)字PCR的應(yīng)用

血漿中ctDNA甲基化數(shù)字PCR檢測(cè)攻略-Naica數(shù)字PCR的應(yīng)用

瀏覽次數(shù):1739 發(fā)布日期:2020-9-22  來源:本站 僅供參考,謝絕轉(zhuǎn)載,否則責(zé)任自負(fù)
 

基因調(diào)控區(qū)的DNA甲基化狀態(tài)的改變可導(dǎo)致多種癌癥的發(fā)生。這種表觀遺傳學(xué)改變?cè)谏飳W(xué)上是穩(wěn)定的,并存在于循環(huán)腫瘤DNA(ctDNA)中,使其適合于早期檢測(cè)和無創(chuàng)動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)腫瘤負(fù)荷。數(shù)字PCR技術(shù)憑借其較高的靈敏度、精準(zhǔn)度以及對(duì)抑制劑的耐受度,在對(duì)低拷貝樣品檢測(cè)時(shí)表現(xiàn)出了極大的優(yōu)勢(shì)。

在轉(zhuǎn)移性和II/III期結(jié)直腸癌(CRC)患者中,WNT抑制因子1(WIF1)和神經(jīng)肽T(NPY)的甲基化程度較高,為了評(píng)估是否可以使用WIF1和NPY的甲基化程度作為一種結(jié)直腸癌標(biāo)志物,法國Stilla Technologies聯(lián)合法國國家科學(xué)研究中心(CNRS)、AP-HP等相關(guān)單位建立了一種將亞硫酸氫鹽法(bisulfite-將未甲基胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶)與數(shù)字PCR相結(jié)合的方法。


 

為了檢測(cè)WIF1和NPY,利用亞硫酸氫鹽-3色dPCR檢測(cè)方法,選擇白蛋白基因ALB作為參考基因,測(cè)試了從健康個(gè)體和CRC患者血漿中提取的ctDNA。并對(duì)WIF1和NPY的LOB和LOD進(jìn)行評(píng)估。

3色Naica Crystal Digital PCR檢測(cè)WIF1和NPY

分別檢測(cè)了10個(gè)來自III期或IV期CRC患者和5個(gè)健康個(gè)體的血漿樣品。來自CRC患者的所有血漿DNA樣本的高甲基化WIF1和NPY得分均為陽性,而在健康個(gè)體中未檢測(cè)到高甲基化的WIF1和NPY。通過將WIF1和NPY濃度與ALB參考濃度對(duì)比評(píng)估,血漿DNA中的高甲基化WIF1比例范圍為8%至93%,而高甲基化NPY的比例范圍為0.1%至78%。血漿樣品中檢測(cè)到的最低甲基化WIF1和NPY量分別為5.1和1.2cp/μL。

通過上述方法,即經(jīng)亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化后再進(jìn)行3色數(shù)字PCR方法,能夠在每25μL體系中可靠的檢測(cè)低至25和5個(gè)拷貝的高甲基化WIF1和NPY,并且該檢測(cè)結(jié)果可以用作通用的結(jié)直腸癌標(biāo)志物和腫瘤特異性突變的替代物。使用3色Naica Crystal Digital PCR檢測(cè)WIF1和NPY,結(jié)果和理論值一致,未出假陰性和假陽性結(jié)果。

Naica數(shù)字PCR平臺(tái)

法國Stilla Technologies公司的Naica數(shù)字PCR技術(shù)在進(jìn)行核酸檢測(cè)時(shí)具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)。系統(tǒng)利用cutting-edge微流體創(chuàng)新型芯片—Sapphire芯片作為數(shù)字PCR過程的唯一耗材。樣品通過毛細(xì)通道網(wǎng)格以30,000個(gè)微滴的形式進(jìn)入2D芯片中。3色熒光檢測(cè)儀器,整個(gè)流程只需要2.5小時(shí),并可進(jìn)行數(shù)據(jù)的質(zhì)控和結(jié)果追溯分析,獲得的數(shù)據(jù)真實(shí)可靠。

 

數(shù)字PCR學(xué)堂

為了方便大家更好的學(xué)習(xí)數(shù)字PCR相關(guān)知識(shí),我們?yōu)榇蠹姨峁┝薌ene-π數(shù)字PCR學(xué)堂(www.cycloudbio.com數(shù)字PCR學(xué)堂快速入口),您可以選擇感興趣的應(yīng)用教程,其中包含從實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)到數(shù)據(jù)分析的詳細(xì)工作流程。您還可以通過搜索導(dǎo)航工具直接搜索特定的項(xiàng)目("dPCR的DNA準(zhǔn)備","熒光溢出"等),或點(diǎn)擊我們的"HOW TO" 選擇您需要的部分(設(shè)計(jì)、分析、報(bào)告)。詳細(xì)信息可登陸網(wǎng)站或掃描二維碼查看。

來源:艾普拜生物科技(蘇州)有限公司
聯(lián)系電話:0512--86860010
E-mail:info@aperbio.com

用戶名: 密碼: 匿名 快速注冊(cè) 忘記密碼
評(píng)論只代表網(wǎng)友觀點(diǎn),不代表本站觀點(diǎn)。 請(qǐng)輸入驗(yàn)證碼: 8795
Copyright(C) 1998-2025 生物器材網(wǎng) 電話:021-64166852;13621656896 E-mail:info@bio-equip.com