細(xì)胞培養(yǎng)中常見的生物污染介紹及觀察方法

簡介：

細(xì)胞培養(yǎng)物污染往往是細(xì)胞培養(yǎng)實驗室最常遇到的問題，有時會帶來十分嚴(yán)重的后果。生物污染物為其主要污染種類之一，例如細(xì)菌、霉菌、真菌、酵母、病毒、支原體以及其他細(xì)胞系的交叉污染。盡管無法徹底消除污染，但是可以通過充分了解污染源以及采用良好的無菌技術(shù)，降低污染發(fā)生的頻率和嚴(yán)重程度。現(xiàn)對幾種常見的生物污染進行介紹：

細(xì)菌

細(xì)菌是一大類廣泛存在的單細(xì)胞微生物。細(xì)菌直徑一般為幾個微米，形態(tài)多樣，例如：球狀、桿狀和螺旋狀。細(xì)菌由于分布廣泛、生長迅速以及體積微小的特點，與酵母和霉菌等一起構(gòu)成了細(xì)胞培養(yǎng)中最常遇到的生物污染。培養(yǎng)物被細(xì)菌污染后，幾天內(nèi)即可通過簡單的肉眼觀察發(fā)現(xiàn)；被污染的培養(yǎng)物通常呈云霧狀（肉眼觀察為渾濁狀態(tài)），有時表面覆蓋一層薄膜。另外，經(jīng)常還會發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基的PH值突然降低，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃，對細(xì)胞生長影響明顯。低倍鏡下觀察，可見細(xì)菌為細(xì)胞之間移動的微小顆粒；高倍鏡下則可以分辨出細(xì)菌的具體形態(tài)。

霉菌

酵母

酵母是真菌界的一種單細(xì)胞真核微生物，為肉眼不可見的微小單細(xì)胞微生物，大小在幾微米（多見）到40微米（罕見）不等，與細(xì)菌污染類似，培養(yǎng)物被酵母污染后也會變得渾濁，特別是進入污染后期，培養(yǎng)物被酵母污染后PH值變化極小，污染嚴(yán)重時PH值才會升高。

顯微鏡下觀察，酵母呈單個卵圓形或球形顆粒，有些還會芽生出較小的酵母顆粒。

真菌

真菌污染是細(xì)胞培養(yǎng)過程中最常見的一種，最常見的真菌有煙曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌培養(yǎng)細(xì)胞受真菌污染后，可見培養(yǎng)液中漂浮著白色或淺黃色的小點，有的散在生長，培養(yǎng)液一般不發(fā)生混濁；倒置顯微鏡下可見絲狀、管狀或樹枝狀的菌絲橫交錯在細(xì)胞之間或培養(yǎng)基中，有的呈鏈狀排列。真菌污染后，細(xì)胞生長變慢，但最后由于營養(yǎng)耗盡及毒性作用而使細(xì)胞脫落死亡。真菌污染一般培養(yǎng)液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開始很像死細(xì)胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，像珊瑚狀，不像細(xì)胞碎片分不清，慢慢的會長出很細(xì)的黑色絲狀物。



真菌生長的比較慢，不象細(xì)菌那么容易被發(fā)現(xiàn)，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細(xì)胞就被污染了，也很難救活了。
 

病毒

病毒是一種微觀感染性物質(zhì)，利用宿主細(xì)胞結(jié)構(gòu)進行復(fù)制，病毒體積微小，因而要檢測培養(yǎng)物中有無病毒以及將其從細(xì)胞培養(yǎng)實驗室所用試劑中去除都十分困難。由于大多數(shù)病毒對宿主有非常嚴(yán)格的要求，因此一般不會對其宿主五種不同的細(xì)胞培養(yǎng)物造成不良影響。但是使用病毒感染的細(xì)胞培養(yǎng)物食卻會對實驗室工作人員造成嚴(yán)重的健康威脅。特別是當(dāng)實驗室培養(yǎng)的是人或靈長類動物細(xì)胞時，通過電子顯微鏡檢查、一組抗體的免疫染色、ELISA實驗或者采用適當(dāng)病毒引物的pcr技術(shù)可以檢測出細(xì)胞培養(yǎng)物中的病毒污染。
 

支原體

支原體是一種沒有細(xì)胞壁的簡單細(xì)菌，被認(rèn)為是能夠自我復(fù)制的最小的生物。由于體積極小，一般小于1微米，支原體的檢測十分困難，除非其達到極高的密度，導(dǎo)致細(xì)胞培養(yǎng)物變質(zhì)。在此之前往往沒有明顯的感染征象，有些生長緩慢的支原體可能會在培養(yǎng)物中持續(xù)存在，而不會導(dǎo)致細(xì)胞死亡。但是這些支原體會改變培養(yǎng)體系中主細(xì)胞的行為和代謝。慢性支原體感染可能包括：細(xì)胞增殖速度降低，飽和密度下降以及懸浮培養(yǎng)物凝集，但是唯一切實有效的檢測支原體污染的方法就是采用熒光染色、ELISA、PCR、免疫染色、放射自顯影或者微生物學(xué)測定技術(shù)定期檢測培養(yǎng)物。

                                                         

      支原體清除劑

       貨號：csp037 

交叉感染

由于細(xì)胞培養(yǎng)操作時各細(xì)胞株所需的器材和溶液沒有嚴(yán)格分開，往往會使一種細(xì)胞被另一種細(xì)胞污染，目前，世界上已有幾十種細(xì)胞都被HeLa細(xì)胞所污染，致使許多實驗宣告無效。雖然不如微生物污染普遍，但是許多細(xì)胞系與Hela細(xì)胞及其他生長迅速的細(xì)胞系間廣泛的交叉污染是一個明確的問題，會造成嚴(yán)重的結(jié)果。從比較靠譜的細(xì)胞庫獲取細(xì)胞系、定期檢查細(xì)胞系的性質(zhì)以及采用良好的無菌技術(shù)是有助于避免交叉污染的慣例方法。通過DNA指紋圖譜、核型分析和同位素分析可以確認(rèn)細(xì)胞培養(yǎng)物有無交叉污染。

細(xì)胞系鑒定（STR）服務(wù)：

STR（Short TandemRepeat，短串聯(lián)重復(fù)序列）基因分型已被ICLAC、ATCC等權(quán)威機構(gòu)作為金標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用于細(xì)胞鑒定 。

細(xì)胞生物學(xué)研究狀況細(xì)胞系作為正�；蚰[瘤組織的模式細(xì)胞被廣泛應(yīng)用于科學(xué)研究和藥物發(fā)，然而很大一部分的細(xì)胞系被錯誤標(biāo)記或被其它個體、組織、種系來源的細(xì)胞所替代 。

在細(xì)胞生物學(xué)領(lǐng)域，文章一直在發(fā)表，科研成果一直在公布，但是當(dāng)中哺乳動物細(xì)胞被錯誤鑒定，存在交叉污染的情況也同時存在著。