THP-1細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中貼壁、聚團(tuán)、復(fù)蘇問(wèn)題分析及解決方法

最近好多小伙伴咨詢(xún) THP-1 細(xì)胞培養(yǎng)各種難題，問(wèn)的最多的還是貼壁問(wèn)題。通過(guò)經(jīng)驗(yàn)總結(jié)和資料查詢(xún)，今天給大家出一份培養(yǎng)攻略，希望幫到大家。

先做一個(gè)簡(jiǎn)短介紹：THP-1 細(xì)胞系最初來(lái)自一位急性單核細(xì)胞白血病患者的血液，屬于懸浮細(xì)胞，有分化為多種巨噬細(xì)胞的能力，是各領(lǐng)域研究常用的細(xì)胞系之一。

表1 THP-1（人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞）細(xì)胞基本信息

圖2 THP-1（人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞）

THP-1單核細(xì)胞正常形態(tài)為懸浮的體積較小、透亮的圓形細(xì)胞，少數(shù)聚團(tuán)成葡萄狀，粒粒飽滿，輪廓清晰（如圖3）。該細(xì)胞在偏酸性環(huán)境中，生長(zhǎng)更快，所以當(dāng)培養(yǎng)基稍微變黃（呈橘紅色）時(shí)，是比較適合細(xì)胞生長(zhǎng)的，此時(shí)補(bǔ)液或半換液即可；開(kāi)啟后的1640培養(yǎng)基，長(zhǎng)期放置pH會(huì)偏高，建議開(kāi)封后一周內(nèi)使用完畢。該細(xì)胞對(duì)血清要求高，血清質(zhì)量差異可能引起細(xì)胞狀態(tài)變化，建議選用高質(zhì)量的胎牛血清。
 

圖3 狀態(tài)良好的THP-1（人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞）

首先，我們要討論的是THP-1貼壁問(wèn)題。THP-1細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)少量細(xì)胞貼壁屬于正常情況（如圖4），不需要擔(dān)心�？梢暂p吹收集細(xì)胞或者丟棄貼壁部分細(xì)胞。但如果當(dāng)貼壁細(xì)胞比例高于20%，說(shuō)明細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境有異常，這時(shí)候就需要排查培養(yǎng)箱溫度及CO2濃度、培養(yǎng)基成分，以及培養(yǎng)器皿是否異常。可用非TC處理過(guò)的培養(yǎng)瓶，不利于細(xì)胞貼壁。
 

圖4 部分貼壁的THP-1（人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞）

然后我們要討論的是THP-1聚團(tuán)問(wèn)題（如圖5所示）。THP-1細(xì)胞在密度較稀時(shí)，有少量細(xì)胞聚團(tuán)屬于正常現(xiàn)象，不建議將聚團(tuán)的細(xì)胞吹散，等待密度高時(shí)，細(xì)胞會(huì)自然分散開(kāi)。當(dāng)細(xì)胞密度高時(shí)，聚團(tuán)細(xì)胞比例高于30%時(shí)，并且細(xì)胞團(tuán)呈糜爛狀，細(xì)胞之間界限不清，胞體質(zhì)膜有潰爛感，這種情況下的細(xì)胞聚團(tuán)是異常的。若對(duì)細(xì)胞沒(méi)有做過(guò)任何實(shí)驗(yàn)處理，可優(yōu)先排查營(yíng)養(yǎng)體系，比如更換血清品牌或增大血清比例（不超過(guò)20%）有助于解決聚團(tuán)問(wèn)題。
 

圖5 嚴(yán)重聚團(tuán)的THP-1（人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞）

最后我們要討論的是關(guān)于THP-1復(fù)蘇不起來(lái)怎么辦？（如圖6所示）該細(xì)胞對(duì)凍存密度有依賴(lài)，凍存密度建議5*106-107/ml；同時(shí)復(fù)蘇密度也有依賴(lài)性，建議不低于3*106/ml。當(dāng)細(xì)胞傳過(guò)幾次代，狀態(tài)較好時(shí)，傳代密度維持在5*105/ml-106/ml為宜，超過(guò)2*106/ml則需要傳代。如有細(xì)胞碎片，待細(xì)胞密度增大后通過(guò)低速離心去除。
 

圖6 復(fù)蘇狀態(tài)很差的THP-1（人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞）

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