活細(xì)胞成像設(shè)備用于細(xì)胞遷移研究

    劃痕實(shí)驗(yàn)又稱(chēng)傷口愈合實(shí)驗(yàn)，是一項(xiàng)常見(jiàn)的細(xì)胞功能實(shí)驗(yàn)，用于檢測(cè)細(xì)胞的遷移能力。原理是當(dāng)單層細(xì)胞生長(zhǎng)到融合狀態(tài)時(shí)，在融合單層細(xì)胞上人為制造一個(gè)空白區(qū)域（即劃痕），之后隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)劃痕會(huì)逐漸愈合，同時(shí)細(xì)胞增殖也參與了這一過(guò)程。
 
    劃痕實(shí)驗(yàn)在一定程度上模擬了體內(nèi)細(xì)胞遷移的過(guò)程，并可根據(jù)需要對(duì)遷移過(guò)程中的活細(xì)胞進(jìn)行成像，分析細(xì)胞間相互作用，而且劃痕實(shí)驗(yàn)也是研究細(xì)胞遷移的體外實(shí)驗(yàn)中最簡(jiǎn)單的方法^[1]。因此，我們可以通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)來(lái)進(jìn)行藥物篩選、化合物毒性、癌癥治療等研究。

    劃痕實(shí)驗(yàn)的基本流程是“培養(yǎng)細(xì)胞→制造劃痕→拍攝遷移圖像→分析數(shù)據(jù)”。
    Celloger^® Mini Plus是一款活細(xì)胞成像設(shè)備，可以根據(jù)用戶(hù)設(shè)定的時(shí)間參數(shù)對(duì)指定的位置進(jìn)行成像記錄。 同時(shí)可通過(guò)使用分析軟件計(jì)算捕獲圖像的細(xì)胞融合度（%），定量分析細(xì)胞的遷移能力。常規(guī)細(xì)胞劃痕工作的全流程，從細(xì)胞培養(yǎng)到完成細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，均可以用該系統(tǒng)來(lái)完成觀察記錄（圖2）。  
應(yīng)用示例：
1、使用Celloger^® Mini Plus在4x物鏡下，記錄明場(chǎng)HeLa、L929、U-2OS、CHO-k細(xì)胞的遷移情況，間隔拍攝時(shí)間為30分鐘，總記錄時(shí)長(zhǎng)為3天（圖3）。  
2、為了驗(yàn)證來(lái)自E2結(jié)合的CAFs的CD147是否單獨(dú)增強(qiáng)了癌細(xì)胞的遷移，在實(shí)驗(yàn)中使用Celloger® Mini Plus記錄48小時(shí)MKN1細(xì)胞的遷移情況，結(jié)果顯示，si- ERα對(duì)caf# 14的處理顯著降低了MKN1癌細(xì)胞的遷移，但通過(guò)添加rhCD147可以恢復(fù)癌細(xì)胞遷移能力^[2]（圖4）。  
結(jié)語(yǔ)：
    評(píng)價(jià)劃痕實(shí)驗(yàn)的常規(guī)方法通常為定點(diǎn)分析，研究者需在固定的時(shí)間（24/48/72h）將樣本拿出培養(yǎng)箱置于顯微鏡下觀察。使用Celloge^®活細(xì)胞成像設(shè)備無(wú)需反復(fù)拿取細(xì)胞樣本，在培養(yǎng)箱內(nèi)即可實(shí)現(xiàn)對(duì)細(xì)胞的可視化以及進(jìn)行長(zhǎng)期動(dòng)力學(xué)測(cè)定。利用延時(shí)成像技術(shù)，可以通過(guò)圖像和視頻來(lái)驗(yàn)證細(xì)胞的遷移能力，豐富研究人員的數(shù)據(jù)以及確保數(shù)據(jù)的客觀準(zhǔn)確性。
 
參考文獻(xiàn)：
[1] Liang CC, Park AY, Guan JL. In vitro scratch assay: a convenient and inexpensive method for analysis of cell migration in vitro. Nat Protoc. 2007;2(2):329-33. 
[2] Bae WJ, Kim S, Ahn JM, Han JH, Lee D. Estrogen-responsive cancer-associated fibroblasts promote invasive property of 
gastric cancer in a paracrine manner via CD147 production. FASEB J. 2022 Nov;36(11):e22597.