指紋圖譜作為中藥復(fù)雜樣品體系質(zhì)量控制強(qiáng)有力的技術(shù)手段,能夠較全面反映中藥內(nèi)在質(zhì)量,已贏得國(guó)際上的廣泛認(rèn)可并得到迅速發(fā)展。2010版中國(guó)藥典收載高效液相色譜特征圖譜7項(xiàng),指紋圖譜13項(xiàng),其中中成藥6項(xiàng),提取物14項(xiàng),為中藥產(chǎn)品質(zhì)量的控制開(kāi)辟了新途徑,成為我國(guó)中藥企業(yè)的一次重大突破。
1、復(fù)方丹參滴丸
【指紋圖譜】色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
用Waters® ACQUITY UPLC® HSS T3(柱長(zhǎng)為100mm,內(nèi)徑為2.1mm,1.8μm)色譜柱;以含0.02%磷酸的80%乙腈溶液為流動(dòng)相A,以0.02%磷酸溶液為流動(dòng)相B,按中國(guó)藥典<一部>第907頁(yè)條件進(jìn)行梯度洗脫;流速為每分鐘0.4ml;檢測(cè)波長(zhǎng)為280nm;柱溫為40℃。理論板數(shù)按丹參素峰計(jì)算應(yīng)不低于8000。
2、三七三醇皂苷
【指紋圖譜】
按中國(guó)藥典<一部>第368頁(yè)條件運(yùn)行,共有5個(gè)色譜峰,其中2號(hào)峰為三七皂苷R1,3號(hào)峰為人參皂苷Rg1,4號(hào)峰為人參皂苷Re,作為參照峰。色譜柱: Waters SymmetryShield™ RP18, 5μm ,250×4.6mm。
3、生脈注射液、參附注射液
【指紋圖譜】色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)
固定相采用Waters SymmetryShield RP18色譜柱(4.6mm×250mm;5.0μm);柱溫30℃,以乙腈為流動(dòng)相A,以水為流動(dòng)相B,梯度洗脫;檢測(cè)波長(zhǎng)為203nm。理論板數(shù)按人參皂苷Rb1峰計(jì)算應(yīng)不低于1350000。測(cè)定法 分別精密吸取參照物溶液和本品各10μl,注入液相色譜儀,測(cè)定。在8~95分鐘范圍內(nèi),應(yīng)呈現(xiàn)十七個(gè)與生脈注射液對(duì)照指紋圖譜相對(duì)應(yīng)的特征峰。按中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)計(jì)算,以特征峰計(jì)算相似度,本品指紋圖譜與生脈注射液對(duì)照指紋圖譜比較,相似度應(yīng)不得低于0.80。另對(duì)供試品色譜圖中所有峰面積值高于人參皂苷Rb1峰面積值的百分之五的色譜峰進(jìn)行積分,非特征峰面積之和不得高于總峰面積的50%。(見(jiàn)國(guó)家藥典委員會(huì)關(guān)于生脈注射液、參附注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)有關(guān)內(nèi)容的公示)
中藥指紋圖譜研究的特點(diǎn)
適合中藥指紋圖譜研究的Waters色譜柱推薦
(1)適合中藥指紋圖譜研究的色譜柱推薦之T3
XSelect™ HSS T3,采用三官能團(tuán)鍵合,低配基密度(~1.6 μmol/m2)C18 烷基鏈鍵合和專利的封端技術(shù),是沃特世公司最先進(jìn)的鍵合和封端技術(shù)的有力體現(xiàn)。
• 在增強(qiáng)極性化合物保留能力的同時(shí),維持了對(duì)中等和強(qiáng)疏水化合物的適度保留能力,又稱“平衡柱”,能夠?qū)ν瑫r(shí)包含強(qiáng)極性和疏水性的復(fù)雜中藥組分提供適中的保留。
• LC-MS兼容
• 耐受100%水相流動(dòng)相
• 分離重現(xiàn)性好
對(duì)應(yīng)的UPLC®色譜柱為ACQUITY UPLC HSS T3,典型應(yīng)用如國(guó)家藥典委員會(huì)公示的護(hù)肝膠囊、護(hù)肝顆粒含量測(cè)定,用ACQUITY UPLC HSS T3(2.1×100mm,1.7μm)分析,要求理論板數(shù)按五味子乙素峰計(jì)算不低于150000。
(2)適合中藥指紋圖譜研究的色譜柱推薦之Shield RP18
Shield RP18色譜柱基于沃特世專利的內(nèi)嵌極性基團(tuán)技術(shù),能夠“屏蔽”(shield,英文有“護(hù)罩” 、“ 屏蔽” 的含義)硅膠表面的殘留硅醇基,使其不能與堿性較大的化合物發(fā)生拖尾作用。Waters Shield技術(shù)在硅膠顆粒和BEH顆粒上均高度成功,SymmetryShield RP18色譜柱在pH2-8范圍內(nèi)提供獨(dú)特選擇性,峰形與分離度都顯著改善,并且完美兼容高水相條件;而B(niǎo)EH Shield RP18更將此諸多優(yōu)勢(shì)拓展到pH2-11的寬范圍,為方法開(kāi)發(fā)提供了極大靈活性。Shield RP18對(duì)含有生物堿、極性組分等中藥體系都是良好的選擇,更有相對(duì)應(yīng)的ACQUITY UPLC色譜柱為獲得超高分辨率和實(shí)現(xiàn)快速分離提供保障。