細(xì)胞實驗室的規(guī)范維護措施與維持細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境的安全

細(xì)胞實驗環(huán)節(jié)中，細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境至關(guān)重要。之前我們已經(jīng)介紹過魚骨圖，熟悉了影響細(xì)胞實驗的微小環(huán)境。今天逍鵬生物為大家分享細(xì)胞實驗室的相關(guān)規(guī)章制度，細(xì)胞實驗室的使用方法和維護措施，確保細(xì)胞實驗室得到正常運轉(zhuǎn)，使工作人員熟悉操作并了解相關(guān)微生物類（含病毒、細(xì)菌等）的潛在危害，避免實驗室工作者及實驗室內(nèi)部環(huán)境暴露于潛在危害性物質(zhì)中，且能夠在安全的環(huán)境下進行技術(shù)研發(fā)工作。
 

本次我們介紹生物實驗室設(shè)備、安全操作規(guī)定、廢棄物處理及實驗室清潔等規(guī)定。

PART1  人員進出管制及物品進出管制

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01  人員進出管制

▲ 操作人員示意圖

細(xì)胞實驗室主要由團隊內(nèi)相關(guān)實驗研究人員使用，原則上不對外開放，其他人員如確實需使用細(xì)胞室，必須預(yù)先征得實驗室負(fù)責(zé)人和該細(xì)胞室負(fù)責(zé)人同意。

1. 進出細(xì)胞室實驗室需要嚴(yán)格登記。如有不符合實驗室工作和生物安全要求的人員或樣本，實驗室負(fù)責(zé)人和細(xì)胞室工作人員有權(quán)責(zé)令整改。

2. 使用人員需參加專門的細(xì)胞培養(yǎng)室使用規(guī)范培訓(xùn)（無菌技術(shù)培訓(xùn)）并通過考核后，方可獲準(zhǔn)進入細(xì)胞實驗室進行實驗。嚴(yán)禁未經(jīng)許可擅自進入細(xì)胞實驗室或使用相關(guān)設(shè)備。

3. 為維持所有實驗區(qū)、準(zhǔn)備室壓差值正常，以維持工作環(huán)境安全性，請進出時隨手將門關(guān)緊，不同區(qū)域之間的門不可同時開啟，以避免發(fā)生污染。
 

02 物品進出管制

所有進入細(xì)胞實驗室的物品需經(jīng)過傳遞窗，盡量經(jīng)過紫外燈光照20min，使用酒精表面消毒。
嚴(yán)禁將可能含有污染物或病原菌的實驗物品帶入細(xì)胞室。細(xì)胞室內(nèi)僅放置少量實驗必需耗材即可，不得整箱搬入，出現(xiàn)潔凈室內(nèi)物品堆積狀況。細(xì)胞室內(nèi)儲物柜的物品放置可由相關(guān)管理人員安排，并做標(biāo)記。

 

PART2 細(xì)胞實驗室設(shè)施介紹

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01 純水系統(tǒng)

日常：保持設(shè)備及管路外觀清潔，定期更換濾芯（1次/3個月）。純化水系統(tǒng)短期停運期間，每三天需運轉(zhuǎn)1～2小時，正常運行下每一個月進行一次巴氏消毒，遇到停機超過7天或純化水微生物超標(biāo)時也需進行巴氏消毒。
砂濾器應(yīng)經(jīng)常進行反沖洗，可安排在班前或班后，反沖洗水流量較大，但切記以不把濾料沖掉。若砂濾器反沖洗完，出水指標(biāo)仍不能達到要求時，則應(yīng)對活性器進行反沖洗，但應(yīng)使反沖洗水流由小到大，以至不將炭粒沖走。
清洗箱的主要作用是主機的電導(dǎo)率達不到≤15us/m時，用來洗膜。為保持清潔，應(yīng)定期進行清洗，在洗液時，必須先將水箱清洗干凈，洗膜結(jié)束須將水箱中剩余酸排凈，以備下次使用。
檢查紫外線殺菌燈，使用時間達到該產(chǎn)品規(guī)定的期限需及時更換。檢查設(shè)備管路及閥門防止泄漏。檢查電器線路連接完好，各開關(guān)指示燈顯示正常。
年度：原水箱每年拆洗一次，一級RO、二級RO水箱每半年拆洗一次。將水箱連接的管路活節(jié)打開，取下水箱后用毛刷刷洗水箱四壁，必要時用消毒液浸泡4～6小時，用大量自來水沖洗水箱，至無泡沫無異味。清洗完畢將水箱安裝復(fù)位，重新接好液位控制器；再在水箱中放水（原水箱可直接放入自來水，一、二級RO水箱需注入純化水）至高液位，浸泡約10分鐘，排空，重復(fù)3次；清洗完畢后可進行下一水箱清洗。
若石英砂過濾器進出水壓差明顯增加（一般增加＞0.05～0.07MPa），反沖洗后產(chǎn)水量及水質(zhì)明顯變差達不到使用要求時，則需更換�；钚蕴窟^濾器中的活性炭一般一年更換一次，具體可視設(shè)備運行情況作適當(dāng)調(diào)整。

反滲透裝置維護：在相同條件下，排除溫度影響，出現(xiàn)下列情況，應(yīng)考慮對反滲透膜進行清洗或更換。

1. 產(chǎn)水電導(dǎo)率比初始或上次清洗后增加10%。
2. 產(chǎn)水量比初始或上次清洗后下降10%。
3. 每年對設(shè)備各泵運行進行檢修一次，確保無滲漏，無異聲。
4. 請專業(yè)人員檢測EDI裝置的工作電壓、電流是否正常。


02 空氣凈化系統(tǒng)
空調(diào)凈化系統(tǒng)是廠房達到GMP要求主要設(shè)備之一，它是空氣通過空調(diào)凈化系統(tǒng)的過濾、冷卻、加熱等達到一定溫度、濕度、潔凈度，送到所需的地方。
如何保持空氣凈化系統(tǒng)的潔凈？保持機組清潔，各部螺栓應(yīng)緊固。每天耳聽有無異常振動和噪音，觀察系統(tǒng)有無變化，發(fā)現(xiàn)問題及時通知有關(guān)人員。空調(diào)機每年保養(yǎng)潤滑一次，電機每年檢修一次。
工藝消毒前的檢查：
1. 檢查供水、回水閥門是否嚴(yán)密，開關(guān)是否靈活；
2. 檢查各部位的空氣調(diào)節(jié)閥門有無損壞；
3. 檢查空調(diào)箱、風(fēng)管等內(nèi)部有無銹蝕，脫漆現(xiàn)象；
4. 檢查配電盤各種電器接線有無松脫；
5. 檢查儀表工作是否正常；
6. 檢查風(fēng)機皮帶的松緊度；
7. 檢查過濾器有無脫落破損，壓框是否變形，螺栓是否松動；
如發(fā)現(xiàn)有缺陷或損壞，應(yīng)立即維修，維修合格后填寫記錄。

03 生物安全柜

▲ 生物安全柜示意圖

每日維護：
用75%的酒精（其他殺菌劑視用戶使用的材料而定）徹底對安全柜內(nèi)部工作區(qū)域表面、側(cè)壁、后壁、窗戶進行表面凈化。不要用含有氯的殺菌劑，因為它可能對安全柜的不銹鋼結(jié)構(gòu)造成損壞。也要對紫外燈和電源輸出口表面進行清潔。當(dāng)清潔安全柜內(nèi)部區(qū)域時，操作人員除了手以外，身體的其他任何部位都不能進入安全柜。
檢查警報并檢測基本氣流。


每周維護：
用75%的酒精（其他殺菌劑視使用的材料而定）徹底對排水槽進行清洗。
檢查俘獲紙孔處的殘留物質(zhì)。


每月維護：
用濕布對安全柜外部表面進行擦拭，尤其是安全柜的前面和上部，把堆積的灰塵打掃干凈。
檢查所有的維護配件的合理使用情況。
上述每日工作中的條目。


每季維護：
檢查安全柜的任何物理異常或故障。檢查熒光顯像管確保它們工作正常。當(dāng)不銹鋼上表面有難以去除的斑點時，可以使用MEK（Methyl-Ethyl-Ketone），使用MEK后，快速用清水和液體清潔劑沖洗不銹鋼板，并且用聚亞安酯布或者海綿進行擦拭，定期清潔不銹鋼表面會使之保持表面的光滑美觀。


每年維護：
具備資格的認(rèn)證技術(shù)人員對安全柜進行性能認(rèn)證，更換紫外燈。
 

04 傳遞窗

清潔方法：萬級潔凈區(qū)使用的傳遞窗用清潔布、消毒劑擦拭清除傳遞窗內(nèi)壁、各角落頂棚、紫外燈管、傳遞窗門等處污跡，污垢堆積處用毛刷、消毒劑刷洗清除污垢。使用時紫外燈照射消毒。十萬級及大于十萬級潔凈區(qū)傳遞窗用濕清潔布擦拭清除傳遞窗內(nèi)壁各角落、頂棚、紫外燈、傳遞窗門等處灰塵污跡，污垢堆積處用毛刷、清潔劑刷洗清除污垢，必要時用消毒劑消毒，使用時紫外燈照射消毒。

05 二氧化碳培養(yǎng)箱

箱體和附件清潔/滅菌（每月1次）：取出培養(yǎng)物，關(guān)閉電源，取出箱內(nèi)所有附件及增濕盤，用中性洗潔劑清洗并用蒸餾水漂洗所有附件，用無紡布或紙擦干，再用75%的酒精噴灑消毒后擦干。用75%的酒精噴灑消毒培養(yǎng)箱內(nèi)膽后擦干，確保內(nèi)膽角落和頂部經(jīng)過同樣處理。
小件物品如螺絲、托盤支架等需用烤箱在180℃消毒，風(fēng)扇也需要通過浸入酒精或用烤箱在121℃烘烤20min消毒。(注意：有嚴(yán)重污染時執(zhí)行)
清潔后裝回所有附件及增濕盤，增濕盤重新注入蒸餾水，等培養(yǎng)箱無酒精味之后開通電源。
增濕盤換水（2周1次）：取出增濕盤，用中性洗潔劑清洗并用蒸餾水漂洗后用無紡布或紙擦干，用75%的酒精噴灑消毒后擦干，將增濕盤放回培養(yǎng)箱并注入蒸餾水同時也可按比例添加（貨號：01-867-1B）Aquaguard-2支原體預(yù)防試劑（最好預(yù)熱至37℃）。

 

06 電動恒溫振蕩水槽

水槽內(nèi)外應(yīng)經(jīng)常保持整潔，外殼切忌用有反應(yīng)的化學(xué)溶液擦拭，以免發(fā)生化學(xué)反應(yīng)。
儀器如長期不使用，應(yīng)將工作室水箱中的水排除，用軟布擦凈并晾干，套好塑料薄膜防塵罩放在干燥室內(nèi)，以免儀器受潮而影響使用。
儀器不宜在高電壓、大電流、強磁場、帶腐蝕性氣體環(huán)境下使用，以免儀器受干擾損壞及發(fā)生觸電危險，禁止在水槽無水狀態(tài)使用加熱器。

 

07 倒置顯微鏡

所有鏡頭表面必須保持清潔，落在鏡頭表面的灰塵，可用吸耳球吹去，也可用軟毛刷輕輕的撣掉。
不能用有機溶液清擦其它部件表面，特別是塑料零件，可用軟布蘸少量中性清潔劑清擦。
在任何情況下操作人員不能用棉團、干布塊或干鏡頭紙擦試鏡頭表面，否則會刮傷鏡頭表面，嚴(yán)重?fù)p壞鏡頭，也不要用水擦試鏡頭，這樣會在鏡頭表面殘留一些水跡，因而可能滋生霉菌，嚴(yán)重?fù)p壞顯微鏡。
儀器工作的間歇期間，為了防止灰塵進入鏡筒或透鏡表面，可將目鏡留在鏡筒上，或蓋上防塵塞，或用防塵罩將儀器罩住。
顯微鏡盡可能不移動，若需移動應(yīng)輕拿輕放，避免碰撞。若細(xì)胞房有污染時，置物平臺用中性清潔劑擦拭，避免交叉污染。
不允許隨意拆卸儀器，特別是中間光學(xué)系統(tǒng)或重要的機械部件，以免降低儀器的使用性能。

 

08 紫外線消毒車

在使用過程中，應(yīng)保持紫外線燈表面的清潔，一般每兩周用酒精棉球擦拭一次，發(fā)現(xiàn)燈管表面有灰塵、油污時，應(yīng)隨時擦拭。
用紫外線燈消毒室內(nèi)空氣時，房間內(nèi)應(yīng)保持清潔干燥，減少塵埃和水霧，溫度低于20℃或高于40℃，相對濕度大于60％時應(yīng)適當(dāng)延長照射時間。
用紫外線消毒物品表面時，應(yīng)使照射表面受到紫外線的直接照射，且應(yīng)達到足夠的照射劑量。
不得使紫外線光源照射到人，以免引起損傷。
在正常使用情況下,紫外線燈管壽命為3000小時以上。

 

09 高溫高壓滅菌鍋

▲ 高溫高壓滅菌鍋示意圖

• 每次滅菌結(jié)束，需對滅菌鍋進行清理，去除鍋內(nèi)、濾污網(wǎng)上的污物。
• 長時間不用了，需將腔室擦洗干凈，保持干燥清潔，并將其關(guān)閉。
• 安全閥：安全閥是保證設(shè)備在設(shè)計壓力安全運行的重要部件，每月應(yīng)反復(fù)提拉數(shù)次，保證其靈活狀態(tài)。
• 管路各濾網(wǎng)應(yīng)每天清洗，確保暢通。
• 壓力表、測溫探頭應(yīng)每年校驗一次。
• 密封圈表面保持清潔，及時消除異物，如有殘損應(yīng)及時更換。
• 鎖緊機構(gòu)應(yīng)每月檢查一次，有無松動卡住現(xiàn)象，發(fā)現(xiàn)及時調(diào)整。

 

10 低溫高速離心機

▲ 低溫高速離心機示意圖

離心蓋上不要放置任何物質(zhì)，每次使用完畢，務(wù)必清理內(nèi)腔和轉(zhuǎn)頭。
臺式高速離心機如較長時間未使用，在使用前應(yīng)將離心機蓋開啟一段時間，干燥內(nèi)腔。
電機的碳刷在使用3000小時后，應(yīng)及時更換，以免磨損整流子。
工作臺及機殼要經(jīng)常保持干凈，離心機不用時應(yīng)套上塑料罩，儲存在空氣干燥無有害氣體浸入的室內(nèi)。
定期用壓縮空氣（吸塵器）清除位于離心機后部散熱片上的灰塵。
臺式高速冷凍離心機可用通常的消毒劑消毒。
如發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)頭被腐蝕及裂痕，應(yīng)立即更換。必須定期用專用的油對轉(zhuǎn)子等進行維護，以避免腐蝕。

 

11 -4℃及-20℃冰箱

冰箱內(nèi)禁止存放與本實驗室無關(guān)的物品。放入冰箱內(nèi)的所有試劑、樣品、質(zhì)控品等必須密封保存。
保持冰箱出水口通暢，非自動除霜冰箱應(yīng)定期除霜，定期清潔冰箱，清潔時切斷電源,用軟布蘸水擦拭冰箱內(nèi)外，必要時可用中性洗滌劑。
若溫度超出規(guī)定范圍，調(diào)節(jié)溫控使其回到正常范圍，并進行記錄。
若溫控調(diào)節(jié)無效，報請設(shè)備科維修，修理后須驗收合格并簽字后方能正常使用。

 

本期介紹就到此結(jié)束了
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       部分內(nèi)容源于《Culture of Animal Cells》第六版

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