簡介:染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)也稱結(jié)合位點分析法,是研究體內(nèi)蛋白質(zhì)與DNA 相互作用的有力工具,通常用于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點或組蛋白特異性修飾位點的研究。將ChIP 與第二代測序技術(shù)相結(jié)合的ChIP-Seq 技術(shù),能夠高效地檢測全基因組范圍內(nèi)與組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子等互作的DNA區(qū)段。 ChIP-Seq 的原理是:首先通過染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)(ChIP)特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA 片段,并對其進行純化與文庫構(gòu)建;然后對富集得到的DNA 片段進行高通量測序。研究人員通過將獲得的數(shù)百萬條序列標(biāo)簽精確定位到基因組上,從而獲得全基因組范圍內(nèi)與組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子等互作的DNA 區(qū)段信息。
二、信息分析
1.原始數(shù)據(jù)整理、過濾及質(zhì)量評估
2.ChIP-Seq序列與參考基因組序列的比對
3.Peak Calling(統(tǒng)計每個樣品的Peak片段信息)
4.Peak Annotation(根據(jù)已有的基因組數(shù)據(jù)庫注釋信息獲得所有Peak位點信息)
5.Motif預(yù)測、基因集分析。
6.全基因組范圍的峰值分布
7.基因組水平和感興趣區(qū)域的數(shù)據(jù)可視化。
三、送樣要求
1.樣品質(zhì)量要求:ChIP DNA OD260/280應(yīng)在1.8至2.0之間。DNA片段大小在100~500bp范圍內(nèi),主帶明顯,建議在250bp左右,同時請?zhí)峁〥NA打斷時的檢測膠圖。樣品最好經(jīng)過ChIP-PCR驗證。
2.樣品濃度要求:樣品量≥60ng(3次),濃度≥200pg/ ul。若單次ChIP后DNA量不夠,建議將2~3次ChIP的DNA合并在一起。
3.樣品包裝:樣品溶于超純水中,放于DNase-free的1.5ml離心管中,管口用封口膜封號。請在樣品管上做好清楚的標(biāo)識,最好寫在標(biāo)簽紙上,貼在管壁。
4.請仔細填寫樣品信息表,并且請同時提供質(zhì)量檢測相關(guān)數(shù)據(jù)和圖片,包括分光光度、電泳膠圖或Nanodrop儀器檢測數(shù)據(jù)等。同樣品一起送樣。
5.樣品運輸:DNA樣品請用干冰或者冰袋運輸。干冰運輸時間不要超過72小時;冰 袋運輸,時間最好不要超過24小時。
四、應(yīng)用領(lǐng)域
由于ChIP-Seq 的數(shù)據(jù)是DNA 測序的結(jié)果,為研究者提供了進一步深度挖掘生物信息的資源,研究者可以在以下幾方面展開研究:
1.判斷 DNA 鏈的某一特定位置會出現(xiàn)何種組蛋白修飾;
2.檢測 RNA polymerase II 及其它反式因子在基因組上結(jié)合位點的精確定位;
3.研究組蛋白共價修飾與基因表達的關(guān)系;
4.CTCF 轉(zhuǎn)錄因子研究。
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上海派森諾生物科技有限公司(以下簡稱“派森諾生物”)成立于2011年4月,公司總部位于上海市徐匯區(qū),是在已有DNA一代測序合成平臺基礎(chǔ)上,以上海交通大學(xué)等海內(nèi)外高等學(xué)校和科研院所的專家教授團隊為技術(shù)依托,吸納了多名基因組學(xué)和生物信息學(xué)高級專業(yè)技術(shù)人員加盟組成的高科技生物技術(shù)公司。
公司之所以取名派森諾生物(Personalbio)是這樣考慮的:首先,人類基因組計劃實施和完成,全面開啟了生命科學(xué)新紀(jì)元,其正帶動著生物科學(xué)研究和應(yīng)用進入個性化時代;其次,測序技術(shù)的飛速發(fā)展,以測序中心獨攬?zhí)煜碌木置嬉矊⒈灰詫嶒炇覟閱挝粋性化形式所打破和取代。另外,由于生物種類和客戶需求目標(biāo)的多樣性,要求有針對性、個性化的專業(yè)服務(wù)。
派森諾生物緊緊跟蹤全球測序技術(shù)發(fā)展步伐,2011年率先引進了亞太區(qū)第一臺羅氏升級版測序平臺(Roche 454 FLX+ system)和中國第一臺Illumina新一代個人化測序平臺(Illumina MiSeqTM),目前擁有Illumina HiSeqTM 2000、Illumina MiSeqTM和Roche 454 FLX+三大高通量測序平臺,確保了對不同類型、不同物種的測序需要。
派森諾生物擁有一支實力雄厚的序列測定和信息分析團隊,在為合作伙伴提供標(biāo)準(zhǔn)化信息分析服務(wù)的基礎(chǔ)上,將根據(jù)客戶需要提供個性化的數(shù)據(jù)分析與培訓(xùn)。派森諾生物承諾,將為廣大合作伙伴提供三大免費服務(wù):免費設(shè)計科學(xué)合理的實驗方案、免費提供常規(guī)生物信息分析和免費修改潤色英文文稿。
派森諾生物始終以“解析序列,詮釋生命”作為企業(yè)理念,秉承“立足客戶需要,滿足個性需求”的服務(wù)宗旨,專業(yè)提供動植物基因組測序、微生物基因組測序、宏基因組測序、RNA測序、簡化基因組及外顯子捕獲等技術(shù)服務(wù)。
目前公司合作伙伴遍布全國,包括中國科學(xué)院、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院、上海交通大學(xué)、華東理工大學(xué)、內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)、南京大學(xué)、瑞金醫(yī)院、新華醫(yī)院、國家海洋局第一海洋研究所、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)、華南農(nóng)業(yè)大學(xué)、溫州醫(yī)學(xué)院、上海海洋大學(xué)、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)、重慶市畜牧科學(xué)院、揚州大學(xué)等,已經(jīng)完成和正在進行多項國家和省市重大或重點科研項目,受到合作伙伴的認(rèn)同和好評。