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CHIP-seq技術(shù)
ChIP-Seq序列與參考基因組序列的比對,Peak Calling,Peak Annotation,Motif預(yù)測、基因集分析,全基因組范圍的峰值分布,基因組水平和感興趣區(qū)域的數(shù)據(jù)可視化。
服務(wù)類別:測序/合成總訪問:1794
最后更新:2013-9-3半年訪問:2
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簡介:染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)也稱結(jié)合位點分析法,是研究體內(nèi)蛋白質(zhì)與DNA 相互作用的有力工具,通常用于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合位點或組蛋白特異性修飾位點的研究。將ChIP 與第二代測序技術(shù)相結(jié)合的ChIP-Seq 技術(shù),能夠高效地檢測全基因組范圍內(nèi)與組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子等互作的DNA區(qū)段。 ChIP-Seq 的原理是:首先通過染色質(zhì)免疫共沉淀技術(shù)(ChIP)特異性地富集目的蛋白結(jié)合的DNA 片段,并對其進行純化與文庫構(gòu)建;然后對富集得到的DNA 片段進行高通量測序。研究人員通過將獲得的數(shù)百萬條序列標(biāo)簽精確定位到基因組上,從而獲得全基因組范圍內(nèi)與組蛋白、轉(zhuǎn)錄因子等互作的DNA 區(qū)段信息。
二、信息分析

 

1.原始數(shù)據(jù)整理、過濾及質(zhì)量評估
2.ChIP-Seq序列與參考基因組序列的比對
3.Peak Calling(統(tǒng)計每個樣品的Peak片段信息)
4.Peak Annotation(根據(jù)已有的基因組數(shù)據(jù)庫注釋信息獲得所有Peak位點信息)
5.Motif預(yù)測、基因集分析。
6.全基因組范圍的峰值分布
7.基因組水平和感興趣區(qū)域的數(shù)據(jù)可視化。

 

三、送樣要求

 

1.樣品質(zhì)量要求:ChIP DNA OD260/280應(yīng)在1.8至2.0之間。DNA片段大小在100~500bp范圍內(nèi),主帶明顯,建議在250bp左右,同時請?zhí)峁〥NA打斷時的檢測膠圖。樣品最好經(jīng)過ChIP-PCR驗證。
2.樣品濃度要求:樣品量≥60ng(3次),濃度≥200pg/ ul。若單次ChIP后DNA量不夠,建議將2~3次ChIP的DNA合并在一起。
3.樣品包裝:樣品溶于超純水中,放于DNase-free的1.5ml離心管中,管口用封口膜封號。請在樣品管上做好清楚的標(biāo)識,最好寫在標(biāo)簽紙上,貼在管壁。
4.請仔細填寫樣品信息表,并且請同時提供質(zhì)量檢測相關(guān)數(shù)據(jù)和圖片,包括分光光度、電泳膠圖或Nanodrop儀器檢測數(shù)據(jù)等。同樣品一起送樣。
5.樣品運輸:DNA樣品請用干冰或者冰袋運輸。干冰運輸時間不要超過72小時;冰 袋運輸,時間最好不要超過24小時。

 

四、應(yīng)用領(lǐng)域
 
由于ChIP-Seq 的數(shù)據(jù)是DNA 測序的結(jié)果,為研究者提供了進一步深度挖掘生物信息的資源,研究者可以在以下幾方面展開研究:
1.判斷 DNA 鏈的某一特定位置會出現(xiàn)何種組蛋白修飾;
2.檢測 RNA polymerase II 及其它反式因子在基因組上結(jié)合位點的精確定位;
3.研究組蛋白共價修飾與基因表達的關(guān)系;
4.CTCF 轉(zhuǎn)錄因子研究。
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