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凝膠遷移或電泳遷移率(EMSA)對外服務(wù)
同位素P32標(biāo)記探針/生物素/熒光素標(biāo)記/進行檢測
服務(wù)類別:分子與細(xì)胞總訪問:8978
最后更新:2024-5-17半年訪問:18
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凝膠遷移或電泳遷移率(EMSA

實驗技術(shù)對外服務(wù)

凝膠遷移或電泳遷移(EMSA)原理:

凝膠遷移或電泳遷移率實驗(EMSA)是一種研究DNA結(jié)合蛋白和其相關(guān)的DNA結(jié)合序列相互作用的技術(shù),可用于定性和定量分析。這一技術(shù)最初用于研究DNA結(jié)合蛋白,目前已用于研究RNA結(jié)合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通常將純化的蛋白和細(xì)胞粗提液和32P同位素標(biāo)記的DNA或RNA探針一同保溫,在非變性的聚丙烯凝膠電泳上,分離復(fù)合物和非結(jié)合的探針。DNA-復(fù)合物或RNA-復(fù)合物比非結(jié)合的探針移動得慢。同位素標(biāo)記的探針依研究的結(jié)合蛋白的不同,可是雙鏈或者是單鏈。當(dāng)檢測如轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子一類的DNA結(jié)合蛋白,可用純化蛋白,部分純化蛋白,或核細(xì)胞抽提液。在檢測RNA結(jié)合蛋白時,依據(jù)目的RNA結(jié)合蛋白的位置,可用純化或部分純化的蛋白,也可用核或胞質(zhì)細(xì)胞抽提液。競爭實驗中采用含蛋白結(jié)合序列的DNA或RNA片段和寡核苷酸片段(特異),和其它非相關(guān)的片段(非特異),來確定DNA或RNA結(jié)合蛋白的特異性。在競爭的特異和非特異片段的存在下,依據(jù)復(fù)合物的特點和強度來確定特異結(jié)合。

主要儀器:

高速組織搗碎機: SWISS KINEMATIC Ltd. Co(型號:PT1600E)

電泳儀:北京六一儀器廠(型號:DYY-8C)

電泳槽:北京六一儀器廠(型號:DYCZ-24D)

轉(zhuǎn)印槽:北京六一儀器廠(型號:DYCZ-40D)

低溫高速離心機:湖南湘儀公司(型號:H2050R)

超低溫冰箱:美國FORMA公司(型號:702)

分光光度計:上海分析儀器總廠(型號:721)

脫色搖床:上海琪特分析儀器有限公司(型號:STS-2)

 

主要試劑:

蛋白質(zhì)預(yù)染分子量marker(118,90,48,36,27,20kd):Fermentas

NC膜:Millipore公司(型號:0.45um)

化學(xué)發(fā)光底物:PIERCE公司

電泳類生化試劑均為美國amresco公司產(chǎn)品

其他生化試劑為國藥集團上;瘜W(xué)試劑公司產(chǎn)品

總蛋白測定試劑盒:南京建成生物工程研究所

NF-KB探針:由Invitrogen公司合成與標(biāo)記

成像系統(tǒng):富士FLA-5000全功能激光影像成像系統(tǒng)

EMSA實驗步驟:

1.探針的標(biāo)記:

2、探針的純化:

3、EMSA 膠的配制:

4、EMSA結(jié)合反應(yīng):

5、電泳分析:

客戶需知:

方法:     生物素/熒光素標(biāo)記/進行檢測。

技術(shù)要點: 實驗過程包括核蛋白的提取,同位素標(biāo)記/生物素/熒光素標(biāo)記/與純化,凝膠電泳,膠片暴光等。在EMSA操作中會用到同位素,要注意實驗室環(huán)境和實驗員的保護。

客戶提供:細(xì)胞。玻担停痰募(xì)胞瓶培養(yǎng)的細(xì)胞!〗M織 200mg-400mg

探針 自備探針! 完成時間:  3-4個星期。

結(jié)果交付:  詳細(xì)實驗步驟,和實驗圖片。

【本平臺合作項目】

分子診斷、病理診斷、藥效學(xué)評價、毒理學(xué)實驗、細(xì)胞藥篩、動物建模、PDX模型、CRISPR/Cas9基因編輯、病理檢測、基因芯片、蛋白組學(xué)、代謝組學(xué)、高通量測序、ChIP、CO-IP、生物信息學(xué)分析、知識產(chǎn)權(quán)服務(wù)!

【全國免費熱線】:400-675-6758

【電話】 023-65316016,023-65316556

【郵箱】 china-western@163.com

【官網(wǎng)網(wǎng)址】www.cqwestern.com

【地址】 重慶高新區(qū)生物醫(yī)藥研發(fā)產(chǎn)業(yè)園D棟

 

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