NTA技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)簡單、快速,不破壞外泌體原始狀態(tài),并且再搭配相應(yīng)濾光片,可以測量熒光抗體標(biāo)記的外泌體來測定外泌體純度,而且具有檢測速度快的特點(diǎn),每個(gè)樣本只需5-10分鐘。
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目前主要的外泌體分離方法是依據(jù)外泌體直徑、結(jié)構(gòu)等特點(diǎn)進(jìn)行富集,或?qū)μ囟さ鞍走M(jìn)行捕獲,產(chǎn)物中不可避免包含一些其他類型的囊泡,需要對外泌體進(jìn)行鑒定,以保證所研究的材料外泌體的濃度和純度。2014年國際細(xì)胞外囊泡學(xué)會(ISEV)提出,外泌體鑒定分為三個(gè)層面:電鏡鑒定形態(tài)學(xué)特征、NTA鑒定粒徑和濃度、蛋白標(biāo)志物。
Zetaview(Particle Metrix)可快速、穩(wěn)定地進(jìn)行外泌體粒徑、濃度和純度鑒定。其方法原理即納米顆粒跟蹤分析(Nanoparticle Tracking Analysis,NTA),單一顆粒跟蹤技術(shù)并結(jié)合經(jīng)典微電泳技術(shù)(zeta電位)和布朗運(yùn)動(dòng),利用Stockes-Einstein方程式計(jì)算出納米顆粒的流體力學(xué)直徑和濃度。NTA是國際細(xì)胞外囊泡學(xué)會(ISEV)和廣大研究者認(rèn)可的外泌體鑒定技術(shù)之一,NTA技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)簡單、快速,不破壞外泌體原始狀態(tài)。并且再搭配相應(yīng)濾光片,可以測量熒光抗體(如CD9, CD63, CD81等)標(biāo)記的外泌體來測定外泌體純度。而且具有檢測速度快的特點(diǎn),每個(gè)樣本只需5-10分鐘。
實(shí)際樣本檢測結(jié)果圖